Restrikciós restrikciós helyek II
II. Típusú restrikció - a géntechnológia fő eszköze. A legtöbb II típusú restrikciós endonukleázokkal specifikusan felismerik DNS tetra- és hexanukleotid szekvenciát, és legalább három közülük - octanucleotides. A rövidebb oligonukleotid-szekvencia restrikciós hely, egy restrikciós enzim felismerhető, a gyakrabban fordul elő véletlenszerűen nukleotidszekvenciához, ahol mind a négy nukleotid képviselt ugyanazon a frekvencián (50% A-T párokat és 50% G-C párok). Így véletlen tetranukleotidszekvencia történik átlagosan minden 256 bázispáron. és hexanukleotid - minden 4096 bp. A természetes DNS-ben azonban a nukleotidok eloszlása jelentősen eltérhet a véletlenszerűtől. Például, eukarióta DNS jellemzi alacsony előfordulási CpG-dinukleotid-és a restrikciós helyek rendre ezeket tartalmazó dinukleotidok (restrikciós enzim HhaI. HpaII. TaqI. Thai. Aval. Haell. Hindii. Sall. Smal. Xhol. Xmal). A termofil baktériumok kromoszómáinak ellenkezőleg, a G-C-párok gazdagodnak (bár nem minden esetben).
A II. Típusú restrikciósok által felismert területek számára jellemző, hogy másodrendű szimmetriát tartalmaznak, azaz az általuk felismert szekvenciák palindromok, például az EcoRI-5'-GAATTC-3 'restrikciós enzimben. Ez azt jelenti, hogy az egyes láncokban elhelyezkedő nukleotidok a szimmetria tengelyével egyenlő távolságban egymást kiegészítőek. Ha a pont a hasítási ellenkező DNS szálak vannak tolva egymáshoz képest a restrikciós hely, eredő emésztése DNS egyszálú végek tartalmaznak kiálló részeket. Mivel ezek a területek maguk és egymás kiegészítik egymást, és kölcsönhatásba léphetnek egymással, gyakran "ragacsos" végeknek nevezik. A „ragadós” végeit a túlnyúló egyszálú rész lehet akár az 5'- és a 3'-végi (ábra. II.1, a). Formai jelzése kialakulását az 5'- vagy 3'-túlnyúló „ragadós” végződik a restrikciós helyek a DNS-lánc hasítási pont a szekvenciában jelölésére használjuk a restrikciós helyet, a bal vagy jobb a szimmetriatengely, ill. Bizonyos restrikciós enzimekben mindkét DNS-lánc hasítási pontja közvetlenül a restrikciós hely alatt helyezkedik el. Ebben az esetben, miután a DNS hasítás „ragadós” végek nem képződnek, és a kapott az úgynevezett „tompa” végek, amelyek nem rendelkeznek túlnyúló egyszálú DNS-szegmensek (ábra. II.1, a). Van egy funkcionális különbség az 5'- és a 3'-túlnyúló „ragadós” véget ér - nem utolsó jelet azok befejezéséig az DNS-polimeráz, amelyeket figyelembe kell venni, amikor kiválasztják restrikciós enzimek előállítására restrikciós DNS-fragmensek.
Bár a restrikciós enzimek BamHI. BclI. A BglII és XhoII különböző restrikciós helyeket ismer fel, ugyanazt a "ragadós" véget alkotják, GATC-t. Ugyanez igaz a SalGI restrikciós enzimcsoportra. XhoI és AvaI (NCGA). Fragmensek ligálása a kialakított restrikciós enzimekkel egy ilyen csoportok azok unió, de a forrás restrikciós helyek elvesznek, ennek eredményeként egy új, folyamatos szekvencia nukleotid (ábra. II.1, b).
Egyes II. Típusú restrikciós enzimek restrikciós helyei nem szimmetrikusak. Például, restrikciós enzim HhaI felismeri, aszimmetrikus szekvencia 5'-GACGC-3”, és az egyszálú törések bevezetett ellenkező DNS-szál, tagolt, az 5 és 10 nukleotid, ill. Az így létrejövő "ragacsos" végek nukleotidszekvenciái egyediek mindegyik ilyen restrikciós helyre. Emiatt a korlátozás miatt a DNS fragmentumok hatására kialakuló, a restrikciós enzim a keverékben vannak csatlakoztatva egymáshoz egy jól meghatározott kezdeti szekvencia, amely egy egyedi nukleotidok szekvenciáját egy „ragadós” végeit DNS restrikciós fragmentumokat. Például, a hasítása restrikciós enzim replikatív formájú fág DNS-t fX174 kialakított 14 fragmentumokat, amelyek kombinálódnak, in vitro a megfelelő sorrendben, hogy fertőző fX174 DNS.
Véletlen kép a Tudásbázisban:
Figyelem! Információ az oldalon
A www.humbio.ru kizárólag oktatási célokat szolgál
és tudományos célokat