Lab № 2 protein kicsapásos reakciónak

előző ◈ a következő

Lab № 2

Reakciók reverzibilis fehérje kicsapódását

fehérjekicsapássai reakció reverzibilis és irreverzibilis. Amikor a reverzibilis a fehérje kicsapódását makromolekula lényegében kitéve mély denaturálási és kicsapás lehet újra feloldjuk az eredeti oldószerben. A reverzibilis kicsapódás hatása által okozott semleges ammóniumsók, az alkáli- és alkáliföldfémek (kisózás), alkohol, aceton, éter és más szerves oldószerek.







Reagensek: tojás fehérje oldat nátrium-klorid hozzáadásával (fehérje csirke tojás elválasztjuk a tojássárgája és feloldjuk 230 cm3 desztillált vízzel, majd az oldathoz hozzáadunk 100 cm3 telített nátrium-klorid-oldattal, az oldatot átszűrjük, gézen, hajtogatott 3-4 rétegben, és a hűtőszekrényben); Telített ammónium-szulfát-oldat; ammónium-szulfát, eldörzsöljük; A 10% -os nátrium-hidroxid; 1% -os réz-szulfát oldat.

Felszerelés: kémcsövek; tölcsér szűréshez; papír szűrőket.

1. Cél Deposition fehérjék ammónium-szulfáttal.

  1. A kémcsőben, 3.2 cm3 tojás fehérje oldatban, hozzáadunk azonos térfogatú telített ammónium-szulfát-oldattal, és az elegyet keverjük.
  2. Csapadékot globulin, albumin oldatban maradnak. Szűrjük a csapadékot szűrőpapíron.
  3. A szüredékhez ammónium-szulfát por, így telített oldatot (az utóbbi nem oldható rész).
  4. A kicsapást az albumin, amely szintén kiszűrik.
  5. Ezután a csapadékot leszűrjük, öblítsük albuminok 5 cm3 vízzel, gyűjtése a szűrletet egy tiszta csőbe.
  6. Folytassuk a szűrletet biuret reakció. Vajon a feloszlatását a albumin?

2. feladat fehérjekicsapássai alkohollal.

Szerves oldószerek kicsapódását okozhatja a fehérjék miatt megsemmisítése a hidrát burok makromolekulák.

  1. A pour csövet 1 cm 3 oldat a tojásfehérje a nátrium-klorid hozzáadásával.
  2. Cseppenként dagály 4-6 cm 3-alkohol, és erősen rázzuk. Miután 5-8 percig. Falls fehérjék kicsapódnak.

Amikor visszafordíthatatlan kicsapódás mély, fehérjedenaturációja és összesítés. Denaturált fehérje nem képes visszaállítani az eredeti fizikai-kémiai és biológiai tulajdonságait. Irreverzibilis kicsapása magas hőmérsékleten, tömény ásványi és a fellépés bizonyos szerves savak, nehézfém ionok, alkaloid reagensek, detergensek, színezékek.







Reagensek: vizes tojásalbumin (oldat ismertetett módon előállított Lab №1; koncentrált kénsav, sósav, és a salétromsav; 5% ólom-acetát-oldat, 2,5% ezüst-nitrát oldatot -edik; 5%-szulfát oldat réz.

Feladat 1. A fehérjék kicsapása ásványi savakkal.

A reakciót alkalmazzuk a gyors meghatározására a fehérje biológiai folyadékokban, mint például a vizeletet.

Ezt a munkát kell végezni Elszívófülke megfigyelése rendkívül óvatosan!

  1. A három csövet öntsünk 15-20 csepp tömény savak: az első - kénsav; második - a nitrogén és a harmadik - a sót.
  2. A csöveket megdöntött 45 o és VIGYÁZAT (egy pipetta) réteg ezeken a területeken a fal fehérje oldat. Cső holding lyuk magukat. Fehérje átnyúló és sav megjelenik fehér gyűrű.
  3. A csöveket óvatosan rázza. Csapadék oldódik kénsav és sósav savak, de nem oldódnak salétromsavban.

Cél 2. Csapadék fehérjék által nehézfémek sói.

A fehérjéket kicsapjuk sói réz, ólom, higany, cink, ezüst és más nehézfémek. A tulajdonsága proteinek nehézfém-ionok lekötésére használnak a gyógyászatban a rendelkezésre elsősegély mérgezés sói réz, ólom, higany.

  1. A három csövet számozott 5-10 csepp öntsük fehérje oldat.
  2. Az első cső, cseppenként az oldathoz ólom-acetát. Egy csapadék képződik. Adjunk hozzá néhány csepp a csapadékot kell feloldják feleslegben só oldat.
  3. Ahhoz, hogy a második cső öntjük cseppenként ezüst-nitrát. A kapott csapadékot oldhatatlan sókat feleslegben.
  4. Egy harmadik fiola, adjunk hozzá réz-szulfát-oldatot, amíg csapadék. Győződjön meg arról, hogy a csapadék feloldódik fölös sót.

Gondoskodjon a kutatás eredményei a táblázat formájában.

Termikus a protein denaturálódását

Amikor melegítjük, denaturált fehérjék. A denaturációs folyamat erős pH hatását, és elektrolit hozzáadásakor.

Reagensek: vizes tojásalbumin (oldat ismertetett módon előállított Lab №1); 1% -os ecetsav; A 10% -os ecetsav; A 10% -os nátrium-hidroxid; A telített nátrium-klorid oldattal.

Felszerelés: csövek, vízfürdő, vagy spirituszlámpa.

  1. Öt számozott csövek Pour 10 csepp tojás fehérje oldatot.
  2. Protein az első csőbe, forrásig melegítjük. Az oldat zavarossá válik (a hidratációs héj körül elpusztult makromolekulák), de nem vált ki csapadék. Képződő micellák makromolekulák, megtartják ugyanazt a díjat, amely megakadályozza, hogy a csapadék.
  3. A fehérje oldathoz a második cső, adjunk hozzá egy csepp 1% -os ecetsavban és az oldat melegítése visszafolyató hűtő alatt forraljuk. fehérje kicsapódik gyorsan. A töltés a micellák semlegesítjük, a protein közel van az izoelektromos pont.
  4. A fehérje oldathoz, a harmadik fiolát, adjunk hozzá 1-2 csepp 10% -os ecetsav oldattal, és forrásig melegítjük. A csapadék nem képződik, mivel a fehérje a micellák által megszerzett csatolásával hidrogénionok, a pozitív töltés, amely megakadályozza azok ülepedés.
  5. A negyedik csőbe adjon 1-2 csepp 10% -os nátrium-hidroxid-oldattal, és forrásig melegítjük. Ez nem csapódik. A micellák által megszüntetése egy protont a karboxil-csoportok a fehérje oldalláncok negatív töltésű.
  6. Az ötödik cső hozzá 1-2 telített nátrium-klorid-oldattal csepp, és forrásig melegítjük. A fehérjét kicsapjuk.

Gondoskodjon a tanulmány eredményei táblázat kitöltésével, és leírom mechanizmus kutatott tényező denaturáló cselekvés formájában kimenet.




Kapcsolódó cikkek

előző ◈ a következő