protein kicsapásos reakciónak
Ismeretes, hogy a természetes állapotban ellenállása miatt tényezők oldatot visszatartott proteineket, amelyek magukban foglalják a felelős a fehérje molekulák és hidratált (vizet) héj körül. Eltávolítása ezek a tényezők vezet agglutináció a fehérje molekulák és kicsapódni a csapadék. Csapadék A fehérjék lehetnek, reverzibilis és irreverzibilis természetétől függően a reagensek.
Váltvaforgató lerakódás - ebben a folyamatban hatása alatt tényezők deponálása fehérjék kicsapódnak, de megszűnése után ezen tényezők, proteineket ismét oldható állapotba, és megszerezni a natív tulajdonságait. Az egyik típusú reverzibilis kisózási kicsapódása fehérjék.
Irreverzibilis kicsapása fehérjék összefüggő mértékű károsodása fehérje szerkezetének (másodlagos és harmadlagos), és a veszteség a natív tulajdonságait. Ilyen változások okozhatnak fehérjék forrásig fellépés tömény oldatok ásványi savakkal és szerves savakkal, nehézfém sók.
Kisózás fehérjék használják az alkáli- és alkáliföldfémek (leggyakrabban használt a gyakorlatban a nátrium-szulfát és ammónium). Ezeket a sókat eltávolítjuk vízköpeny (ok dehidráció), és távolítsa el a töltést. Között a víz mennyisége borítékot a molekulák fehérje és sókoncentráció, van egy közvetlen kapcsolat áll fenn: minél kisebb a hidrát burok, a kevesebb só szükséges. Így, globulinok, amelyek a nehéz és a nagy és a kis molekulák vizes shell csapadékot hiányos telítési sók oldat és albuminok, mint a kisebb molekulák körül nagy víz shell, - teljes telítettséget.
Fehérje denaturáció (irreverzibilis csapadék) csökken a megsemmisítése a tercier és részben másodlagos szerkezete a fehérjemolekula vrezultate szakadás hidrogénkötések és a veszteség a biológiai tulajdonságok vagy a natív. Amikor irreverzibilis precipitációs reakciók fehérjék mennek keresztül mélyreható változásokat, és nem lehet oldható az eredeti oldószerben. Irreverzibilis fehérjekicsapássai reakciók közé tartoznak Nehézfémek sói, szervetlen és szerves savak, alkaloid csapadék reagensek és visszafolyató hűtő alatt.
1. kísérlet kisózás fehérjék ammónium-szulfáttal.
A módszer elvét. A kisózási - a mellett a fehérje oldatot semleges sók (Na 2SO 4 (NH4) 2SO 4.). kisózási mechanizmus tartalmaz reagens anionokat (SO4 2-) és a kationok (Na + NH4 +.) fehérje díjak (csoport NH4 + és COO -). Ennek eredményeként a töltés eltűnik, és ennek megfelelően a kölcsönös taszítása molekulák eltűnik. Ugyanakkor jelentősen csökkentette hidrátburok. Mindez azt eredményezi, hogy „blokkoló” molekulák és a lerakódás.
Telített ammónium-szulfáttal kicsapott frakciót albumin fehérjék félig telített - globulin frakciót.
ÖSSZEFOGLALÁS reakció a kiszáradás a fehérje molekulák.
Az, hogy a teljesítményt.
A pour cső 30 csepp hígítatlan tojásfehérje és a hozzáadott azonos mennyiségű telített ammónium-szulfát oldat. Stirred a cső tartalmát. Így kicsapódott frakciót albumin fehérjék.
Elkészített félig telített ammónium-szulfát-oldattal, és jól összekeverjük (1: 1) a tojásfehérje, a globulin frakciót kicsapjuk, és a tojásfehérje oldatban maradnak. Az utóbbit leszűrjük, majd elkeverjük egy por ammónium-szulfát, amíg amíg további sót oldódás, a csapadékot - albuminok.
A kapott csapadékot (albuminok és globulinok) adunk hozzá vizet, és megfigyeljük az oldódás. Ez azt bizonyítja, hogy a sózás - a folyamat visszafordítható.
Így az élmény: az eredmények az élmény írva a notebook és levonni.
2. kísérlet kisózás fehérjék nátrium-klorid és magnézium-szulfát.
A módszer elvét. A kisózás fehérjék oldatból alkalmaznak nátrium-klorid, nátrium-szulfát, nátrium-acetát, magnézium-szulfát, kálium-acetát, kalcium-klorid, kalcium-nitrát és ammónium-szulfát. Néhány sóik nem csak fehérjék kisózzuk az oldat telítettségét; bizonyos proteinek és kisózás sók, megfelelően alacsony koncentrációban. Ilyen sók közé tartoznak az ammónium-szulfát. A feltételeket, amelyek mellett a csapadék ammónium-szulfát, így jellemző az egyes fehérjék (ritka kivételektől eltekintve), hogy ez a tulajdonság a fehérjék lehet hasonlítani a oldhatóságát jellemző a kristályos anyagot.
A fehérjéket az aminosavakból álló, és ezért amfoter tulajdonságokkal. Amikor a vízben oldott fehérjék hidrogén-ion, eredő disszociációs a karboxil-csoport kapcsolódik, hogy egy amino-csoport. Ezért fehérjemolekulák viseli mind pozitív, mind negatív töltéseket. A töltés mennyisége száma határozza meg az ionos csoportok. Egy bizonyos pH teljes elektromos töltés a fehérje molekulák egyenlő nullával. Az ilyen pH-érték az úgynevezett izoelektromos pont (Pj). A izoelektromos pontja a fehérje oldatok minimális stabilitását, mert hiányzik a fő stabilizáló faktor - töltésű és ezért könnyen kicsapódik. Határozza meg a fehérje izoelektromos ponttal, meghatározzuk a pH, amelyen a fehérje oldatot a leginkább homályos. A legtöbb fehérje izoelektromos pont fekszik egy gyengén savas környezetben.
Csapadék fehérjék NaCl és MgSO 4 - nátrium-klorid és magnézium-szulfát, ellentétben az ammónium-szulfáttal kicsapott globulinok a telített oldat. A izoelektromos pontja azonos sók globulinok kicsapjuk alacsony koncentrációban.
Az, hogy a teljesítményt.
A két csöveket kiöntöttük 5 ml 1% fehérje-oldatot, keverés közben hozzáadjuk a teljes telítődésig (ha a kristályok maradnak nerastvoronnoy ellenére agitáció) egy csőbe finoman elporított nátrium-klorid, a másik - a magnézium-szulfát. Néhány perccel később a két cső van egy betét a globulin. Csapadék kiszűrjük, és a szűrlethez hozzáadunk néhány csepp hígított ecetsavval (CH 3 COOH) - gyengén savas közegben esik albuminok. albumin-oldat, mint a pH megközelíti az izoelektromos pont.
A vizes oldatot a fehérje részecskék vannak töltve, és erősen hidratált, ami stabilitását a fehérje megoldásokat. Azonban a magas koncentrációjú sók, ionok, amelyek szintén nagyon hidratált membránokat elpusztult vizes protein molekulák és töltést eltávolítjuk a protein-molekula tartalmaz adszorbeálva só ionok.
Ennek eredményeként e két folyamat instabillá válnak fehérje oldatok, fehérje részecskék összeolvadnak egymással, egyre nagyobbak és végül kicsapjuk.
Így az élmény: az eredmények az élmény írva a notebook és levonni.
3. kísérlet alvadási fehérjék melegítés.
A módszer elvét. Elvesztése fehérje a csapadékot melegítéssel jellemző szinte az összes fehérjét (kivéve a zselatin, koaguláció nem hevítve). Egy különösen egyszerű és teljesebb kicsapódását fehérje előfordul egy gyengén savas közegben a közelében az izoelektromos pont. A semleges és erősen savas környezetben, van egy A fehérjék kicsapása sokkal rosszabb, és a lúgos környezetben nem figyelhető meg.
A lúgos közegben redukáljuk disszociációja fehérje diamino gyökök, a molekulái szerezhet negatív töltés, úgy, hogy az oldatban marad akkor is, ha forrásig melegítjük.
Hozzáadása a fehérje oldathoz semleges só (NaCl) elősegíti és gyorsítja a koagulációs fehérjék át forralás miatt jön dehidratáló fehérje részecskék.
Az, hogy a teljesítményt.
Az 5 cső öntjük 2 ml. fehérje: az első csövet felmelegítjük, és a csapadék jelenik meg, mielőtt a folyadék forrni kezd. Ahhoz, hogy a második cső adunk 1 csepp 1% -os ecetsav (CH3COOH) és fűtött. fehérje flocculent kicsapódik gyorsabban és teljesen, mint az első kémcsőbe annak a ténynek köszönhető, hogy az az oldat savanyítása pH közel a izoelektromos pontja a protein (fehérje e = 0). Egy harmadik fiolában 0,5 ml. 10% -os ecetsav (CH3COOH) és fűtött. A csapadék nem képződik, még forralás hatására. A negyedik csőben készített oldatához 0,5 ml. 10% -os ecetsav (CH3COOH) és néhány csepp telített nátrium-klorid-oldattal és melegítjük. A pelletet. Az ötödik cső készült oldatához 0,5 ml. 10% -os lúgoldatot és melegítjük. A csapadék nem képződik akkor is, ha főtt. A munka.
A vizsgálati eredmények és a következtetések, a táblázatban.
4. kísérlet Csapadék fehérjék által nehézfémek sói.
A módszer elvét. Csapadék a fehérjék sói nehézfémek, ellentétben a kisózási fordul elő alacsony koncentrációjú sók. Fehérjék kölcsönhatásban sói nehézfém (ólom, réz, ezüst, higany, stb). Adsorb őket, és a komplex só-képző vegyületek oldható feleslegben a sók (kivéve a sókat AgNO3, HgCl2), de nem oldódik vízben. Oldjuk fel a csapadékot feleslegben sók adszorpciós nevezett peptizálása. Ez a jelenség előfordulása miatt az azonos nevű, a pozitív töltés a fehérje részecskék. Ha a csapadék nem oldódik hígításkor, majd, a reakció gyakorlatilag visszafordíthatatlan. Fémionok kialakítására képes oldhatatlan vegyületek a fehérjék toxikusak a számunkra.
Így, nehézfémek sói: Hg, Ag, Cu, Pb, stb okoz maradandó lerakódását fehérjék, velük együtt vízben oldhatatlan vegyület.
Azonban a túlzott bizonyos sók figyelhető kezdetben feloldjuk a képződött csapadékot. Ez annak köszönhető, hogy a felhalmozódása a fémionok felületén a denaturált protein és a megjelenése pozitív töltést a fehérjemolekula.
fehérje erősen kötődnek nehézfém ionokkal oldhatatlan csapadékot alkotnak, vízben használták továbbá mint antidotumot, hogy mérgezés higany-sók, réz, ólom, és mások. után azonnal mérgezés általánosan használt tej vagy tojás fehérjék, mégis ezek a sók a gyomorban, és nem időt, hogy felszívódik. A fehérje dacha beteg hánytatni eltávolítani a mérget a szervezetből.
A pozitív töltésű nehézfémionok (kationok) alkotnak erős kötések a negatív töltésű karboxilcsoport anionok fehérje R-csoportok, és gyakran okoznak folytonossági ionos kötésekkel. Ezen kívül csökkentik az elektromos polarizáció fehérje csökkenti annak oldhatóságától. Következésképpen, a fehérje oldatban kicsapódik.
Az, hogy a teljesítményt.
A csövet 2 öntöttünk 1 ml. fehérje-oldatot lassan, cseppenként hozzáadjuk keverés közben egy 2-3 csepp a réz-szulfát-oldatot, a másik ólom-acetát. Mindkét cső pelyhes csapadék esik képződése következtében a nehezen oldódó só-szerű vegyület kék (ek SuSO4) és a fehér (Pb (CH3COOH) 2) színben.
Így az élmény: az eredmények az élmény írva a notebook és levonni.