A mikroorganizmusok tenyésztéséhez
A mikroorganizmusok tenyésztéséhez
A sikeres mikroorganizmusok tenyésztéséhez fontos, hogy ne csak kiválasztani a megfelelő diéta és a jogot, hogy magot termelni, de még mindig kell optimális feltételeket teremteni: hogy a megfelelő hőmérséklet, páratartalom, levegőztetés. Általános szabály, hogy a sikeres mikroorganizmusok tenyésztéséhez a laboratóriumban csak kezelni egy gondos játszik a természetes környezeti feltételeket.
Az optimális tenyésztési hőmérséklet a legtöbb patogén melegvérű állatok (beleértve az embert) mikroorganizmust (37 fok) hozzon létre egy kemencében.
A termosztát egy olyan eszköz, dupla falú, amelyek között van a levegő vagy víz. Víz felmelegítése elektromos áram. A termosztát a termosztát automatikusan fenntartja a kívánt hőmérsékletet, és a hőmérő hőmérsékletének figyelésére.
Kémcsövek növények rácsokra helyezik a termosztát polcokon. A lemezeket az inkubátorba kell fejjel lefelé.
Ahhoz, hogy a levegő szabadon áramolhasson a kemencében, és a melegítést egységes, a polcon a sütőben készült nyílások és szorosan nem töltődik be.
Annak érdekében, hogy ne hűtse le a kultúra, a termosztát nem véglegesen nyitva maradt.
Amikor a tenyésztett folyékony táptalajon, a probléma a fenntartása a páratartalom.
Frissen agar táptalaj mindig tartalmaznak egy bizonyos mennyiségű csepegtető - folyékony víz. Ez észrevehető formájában egy többé vagy kevésbé bőséges kondenzációs azonban hosszú távú tárolására a kultúrák szilárd táptalajon szobahőmérsékleten vagy akár hűtött környezetben kiszáradnak, ami ahhoz vezethet, hogy a halál mikroorganizmusok. Ezért szükséges, hogy a rendszeres időben szubkultúrák kultúrák, elkerülve szárítás környezetben. Ha azt tervezi, hosszú ideig tartó termesztés egy inkubátorban, majd a lemezeket vagy csöveket a legalkalmasabbak nedves kamrában, azaz egy zárt edényben, ahol van egy víztartály. Egyes gombák nőhetnek szilárd szubszt nélkül csöpög - a folyékony közeg, de nedves atmoszférában.
Azon a napon, az ültetés sűrű tápközegek, amelyek alapján agar - agar, megolvasztjuk vízfürdőben, és a folyékony öntjük steril Petri-csészékbe. Megszilárdulása után az agar, és szárítás a páralecsapódást a kemencében, akkor koca a agarlemez. Kaszálni szilárd táptalajon kémcsöveket is jobb a vetés napján. Amikor tenyésztünk mikrobák különösen érzékenyek a nedvesség távollétében (például Neisseria gonorrhoeae), így egy szabadtéri termosztát edényt vízzel.
A túlnyomó többsége a baktériumok, beleértve a kórokozókat, a fény nem szükséges. A közvetlen napfény hátrányosan befolyásolja a fejlődését számos szervezet, így tenyésztjük sötétben termosztátok. Azonban a tanulmány a pigmentáció fordul elő, hogy aktívabban szórt fény, a kultúra után is fennmaradjon a termosztát 2-3 nap alatt beltéri világítás.
A használt mikroorganizmusok a folyamat cseréje fényenergia anyagok, termesztett megvilágítás. Világításra általánosan használt izzólámpa 75-100 watt. Amikor Algatermesztés lehet használni, és fénycsövek.
A legtöbb patogén baktériumot tenyésztjük 18-24 órán át, de vannak típusú fejlődő sokkal gyorsabb (Vibrio cholerae 8-10 óra) vagy lassabban (Brucella 5-27 nap, tuberkuiózisbaciiusos 4 - 6 hét, stb).
Időtartama, a mikroorganizmusok tenyésztéséhez függ terjedésének sebességét. Annak érdekében, hogy a nedvesség a fiolákat, ha hosszú ideig tartó termesztés mikrobák, gyapot dugó után vetés helyébe steril gumi vagy tedd gumisapkákkal.
Igényei szerint mikrobák szabad oxigént osztva obligát aerob (kórokozói a kolera, pestis, tuberkulózis), anaerobok (aktivátorok tetanusz, botulizmus, gáz sebfertőzés, Bacteroides) és fakultatív anaerob baktériumok (kórokozók a tífusz, vérhas, Staphylococcus és mások.). Ezek a csoportok igényelnek a különböző tenyésztési körülmények között.
Amikor tenyésztését aerob és fakultatív anaerob áramlása szükséges oxigén végzi passzív és aktív levegőztetés.
Passzív levegőztetés - egy, a mikroorganizmusok tenyésztéséhez a szilárd és folyékony táptalajon, zárt egy pamut vagy pamut - géz dugók, valamint a szilárd táptalajon Petri-csészékben. Ebben az esetben, a mikroorganizmusok alakulnak ki a felületén a közeg és oxigén közvetlenül kapjuk a levegőcső vagy Petri-csészében. Ezért, amikor a felület a mikroorganizmusok tenyésztésére próbálják fokozni érintkezési területen a közeg levegővel. Ehhez, öntsünk egy vékony réteg közepes csészébe széles alsó (Petri-csészék, lombikok Vinogradski, matracok).
A folyékony közeg aerob mikroorganizmusok növekedését a film formájában, általában meglehetősen sűrű. Fakultatív anaerobok és fejleszteni a vastagsága a folyékony közeg alkotnak egy többé-kevésbé egységes turbiditás vagy pehely. Jellemzőjük a kevésbé sűrű filmet, mint az obligát aerob.
Felületi termesztés alkalmazott mikroorganizmusok a laboratóriumokban és az iparban.
Aktív levegőztetést alkalmaznak mély baktériumok tenyésztéséhez amikor termesztik nagy mennyiségben környezetben. Annak érdekében, hogy elegendő oxigén ilyen kultúrákban, ezek helyeznek speciális Rocking - állandó keverés közben kultúra biztosítja a levegővel érintkezve. Amikor tenyésztjük mikrobák folyadék térfogata olyan magas, mint több tíz vagy több száz litert használunk nevezett készülék reaktorok vagy fermentorokban. Levegőt fújnak át a kultúra révén speciális eszközökkel.
A tenyésztést anaerob baktériumok nehezebb, mint aerob, ahogy kell megfosztani szabadon elérhető légköri oxigén. Ebből a célból a tenyésztőközeget eltávolítottuk a levegő különféle módszerekkel:
1. oxigén eltávolítása mechanikus úton. Anaerob mikroorganizmusok tenyészthetők hagyományos Petri-csészébe helyezve őket közvetlenül vetés után anaerob, amelyet azután légtelenítjük. Anaerob - egy fém vagy üveg vákuumban szárítottuk. Metal anaerob hermetikusan záró fedéllel van ellátva és egy nyomásmérőt. Ők képesek fenntartani a magas vákuum sokáig. Üveg vákuum szárítók vannak földi fedél darus a levegő- kiürítését. Földi-felületet exszikkátorban, hogy elkerüljük levegő bejutását különleges bevont vákuum zsír.
2. A helyettesítési anaerob levegő, nitrogén, argon, hidrogén vagy ezek elegyét nitrogén és szén-dioxid.
3. ápolása magas oszlopon agar glükózzal. Ebben az eljárásban, a mikroorganizmusok növekednek az alsó védve magas a levegő-réteg.
4. oxigén eltávolítása érhető során kémiai eszközökkel való oxidációja oxigénnel különböző anyagok a közepes és tenyésztőedényekbe.
5. Módszer Vignal - Veyona, hogy vetés végezzük egy kémcsőbe, és megolvasztjuk ostuzhennym 45 fok agar. A csövek tartalmát keverjük, és készült egy Pasteur-pipettával útján körte, pipettával töltelék tetejére. Ügyelni kell arra, hogy nem valósult meg a pipetta légbuborékok. A vékony végét a pipetta lezártuk és inkubátorba helyezzük pipettával. A vastag agar anaerobok nőnek izolált kolóniák.
6. hozzáadása redukáló környezetben (oxidáló) vegyületek. Használata környezet Kitt - Tarotstsi tartalmazó redukáló anyagok 0,5% glükózt, máj darabok vagy tojás fehérje. Az inokulálás előtt a tápközeget 20 percig forraljuk vízfürdőn, hogy oldott oxigén eltávolítására azokból. Vetés előtt csövet olyan tápközegben öntjük steril felületre réteg olaj 0,5-1,0 cm anaerobok védelmet penetráció oxigén.
7. A biológiai módszer Fortner. A Petri-csészébe öntjük, vastag agar 5% vérrel. Hogy a kultúra nem keverve, az átmérője a csésze hogy a horony az agar. Az egyik felét a táptalajt beoltjuk aerob, a másik - anaerob. Az élek a csészéket óvatosan paraffinba ágyaztuk. Növények hozott egy inkubátorban. Első nőnek aerob és felszívódás után a jelen lévő oxigén a pohár, fog kidolgozni anaerobok.
Tenyésztése Actinomycetes, gombák, mikoplazma, L-formák, spirochéták és protozoák alapvetően hasonló a tenyésztés a baktériumok. Számukra kifejlesztett speciális környezet, és a kiválasztott üzemmód megfelelő az igényeiknek.
By típusú élelmiszer gombák heterotróf. Szénforrásként gombák is használhatja a legtöbb szerves anyagok. Azonban néhány gomba glükózt jobban, mások - fruktóz vagy pentóztranszportert. Nitrogénforrásként gombák felhasználhatjuk az ilyen szerves vegyületek, mint fehérjék, pepton, peptidek, aminosavak, sók, nitrátok, nitrogén-atmoszférában. A tartomány a ezek használatát nitrogénforrás változik a különböző gombafaj.
A növekedés és az élet gomba szükséges ásványi anyagok. Továbbá makrotápanyagok (szén, oxigén, hidrogén, nitrogén, kén, foszfor, kálium, kalcium, magnézium, vas), és szükségük van mikroelemek (mangán, cink, réz, kobalt, nikkel, stb).
Vitaminok fontos szerepet játszanak a fiziológia gombák. A szükséges vitaminokat gombákban növekedés függ a reakció.
a legtöbb gomba nagyon szerény tekintetében közegben. Ezek jól növekednek sokféle szubsztrátok: burgonya, sárgarépa, cukor agar, glicerin agaron. Optimális gombák növekedését hőmérsékleten megy végbe a 26 - 28 fok. Attól függően, hogy az adott készítmény a táptalaj chvoystv kultúra egy gomba változhat.
Gomba termesztenek különböző célkitűzések - fenntartani életképes állapotban a funkció elvesztése nélkül és szerkezeti jellemzők azonosítására, előállítására a termékek az anyagcsere gombák, megőrzése termesztett növények, stb Médiaválasztékot tenyésztéséhez gombák függ a vizsgálat céljától, valamint a biológiai jellemzői a mikroorganizmus.
Környezet a gombák termesztésére a kompozíció a összetevők: 1. Természetes - különféle szubsztrátok növényi vagy állati eredetű (gyökeres zöldségek, gabonafélék és szemes, levelek és szárak a növények, állati szervek és szövetek).
2. Félig szintetikus - egyesítjük közepes természetes szubsztrátok és kémiailag ismert komponenseket.
3. Szintetikus - amely az összetevők ismert készítmény. Különböző kombinációit a hozzávalókat a szintetikus táptalajok, és ezek koncentrációja nem különösen korlátozott, és lehet használni, hogy meghatározzuk a különböző életfolyamatok gombák fűződő növekedés, szaporodás és a fiziológiai aktivitás.
A sugárgombák leginkább megfelelő táptalajon lúgos glicerin agaron, a burgonya, a savó, a hús és ascites közepes és Sabouraud agar-agar. Kultúrnövények között tenyésző aerob és anaerob körülmények között 35-37 fok, legalább két hétig.
Termesztése bélprotozoonok speciális táptalajon biológiai módszer gazdagodás, amely lehetővé teszi egyetlen példányban a paraziták betelni velük. Növelése példányszám következtében a tenyésztési közép- megkönnyíti az észlelést és vizsgálata paraziták.
használt táptalaj tenyésztésére intesztinális amőbák, amely a következő négy tojást és Locke közepes (1000 ml desztillált vízzel, NaHCOz - 0,2g, kalcium-klorid - 0,2 g, KCI - 0,4g, NaCl - 9,0g, glükóz - 2 , 5g, pH - 7,4). A lesarkított a táptalaj felületén, a csövek kerülnek megdöntött pozícióban egy berendezést koagulációs és tartjuk 70 fok a keményedést megelőzően. Vetés előtt a kémcsőbe szilárd táptalaj adunk néhány csepp emberi vagy inaktivált lószérummal és 1 - 2 hurok steril rizs húslevest.
egy tojást adunk a tenyészethez ostorozza 200 ml Locke-féle tápközegben, és a kapott elegyet gőzfürdőn 15 percig. Az elegyet ezután szűrjük át cheesecloth, öntjük 5-6 ml kémcsövekbe és autoklávban nyomás alatt, 20 percig.
Amikor tenyésztett balantidiums lehet használni Frenkel közegben (aszparagin 4,0g, 6,0g ammónium lacticum, kálium-foszfát diszubsztituált 2,0g, 5,0g NaCl, 1000 ml desztillált víz). A táptalajt autoklávban sterilizáljuk 20 percen át 120 °, 1 atm. Ezután ehhez adunk steril lószérumot 1:10 hígításban és 2 - 3 csepp keményítő (pH 7,2-7,4).
A tenyésztést végezzük legegyszerűbb termosztátban 37 fok. Szubkultúrák végeznek a nap folyamán.
Rickettsia, Chlamydia és vírusok szigorú intracelluláris paraziták, nem termesztik a mesterséges táptalajon termesztésére használt baktériumok, gombák, mikoplazma és protozoák.
Rickettsia saját metabolizmusát, de egymástól teljesen energia függ szöveti sejtek, így a Rickettsia és intracelluláris paraziták. A gazdasejt egyes fajok Rickettsia párhuzamosok csak bizonyos helyeken: a citoplazmában, a nucleus vagy sejt vakuólumokat. Rickettsiák tenyésztjük a bélben tetvek, szikzacskója fejlődő csirkeembrió tüdősejtek albínó egereket neperevivaemyh sejteket szövettenyészetben.
Megfigyeltük nemcsak chlamydia energiafüggőségét szöveti sejtek, de gyengén kifejezett anyagcsere tevékenységét. Ezért chlamydia lehet tenyészteni csak a szikzacskója fejlődő csirkeembrió sejtek vagy szövettenyészetben.
Termesztése vírusok végzik ezek szétosztására és felhalmozási diagnosztikai célokra, azok későbbi vizsgálatban, a biológiai termékek, a tanulmány a virális onkogenezist és patogenezise vírusos fertőzések.
A vírusok szigorú intracelluláris paraziták és termesztés alkalmazunk (szigorú ellenőrzése alatt) három módszer:
1) a szervezetben olyan fogékony állat;
2) a fejlődő csirkeembrió;
3) sejttenyészetben.
A virológia gyakorlatban a termesztésére vírusok alkalmazásával előnyösen újszülött állatok, mivel sokkal érzékenyebbek a vírusok. Ez az eljárás csak korlátozott mértékben alkalmazható, mivel a vírusok nagyon hangsúlyos egyedi tropizmusuk.
Csirke embriókat termesztésére használt csak néhány vírus - influenza, herpesz, természetes és majomhímlő, mumpsz.
A legszélesebb körben használt virológia gyakorlatban a termesztésére vírusok alkalmazásával sejt szövettenyészetek. Ezek a sejtek életképesek generációk száma is három csoportra oszthatók:
1. Elsődleges;
2. átültetett;
3. Poluperevivaemye.
Az elsődleges tenyészetek sejtkultúrák, amely ellenáll nem több, mint 5-10 részeket. Ezeket előnyösen állítjuk elő az embrionális szövetekből: humán magzati vese szöveti és majmok, humán amnion, csirkeembrió, magzati egerekben hanem a vesék felnőtt majmok.
Azáltal poluperevivaemym sejttenyészetek olyan kultúrák diploid sejtek származó humán embrionális fibroblasztokban. Ezeket a sejteket 150 generációk, miközben az eredeti diploid kromoszóma. Diploid sejtek már széles körben használják a virológia.
Az immortalizált elő túlnyomórészt tumorsejtek az azonos típusú jól in vitro szaporítjuk hosszú ideig. Az ilyen sejtek közé tartoznak bevezető vezetékek származó humán karcinóma (HeLa, Hep -2 et al.). A fő előnye a folyamatos vonal előtt az elsődleges kultúra sejtek képesek szaporodni in vitro hosszú távon több generáció.
Növénytermesztés bármilyen típusú sejt táptalaj van szükség. A legszélesebb körben elfogadott szerda 199. A készítmény ebben a közegben tartalmazó ásványi sók, glükóz, aminosavak, vitaminok, CO - enzimek és sok más komponenseket. Ezen túlmenően, a tápanyag közegre van szükség, hogy a szérum és a pufferek fenntartani stabil pH. Ahhoz, hogy elkerüljük a baktériumos fertőzést, antibiotikumokat adunk a közeghez.