vírustenyésztés módszerek
vírustenyésztés módszerek. sejttenyészetekben
Élősködő genetikai szinten, mint az NA-molekula, vírus, mentes az energia-rendszerek nem, mint a baktériumok szaporodnak mesterséges közegben. A folyamat a reprodukciós (szaporodási) teljes mértékben annak köszönhető metabolizmusa korlátozott tartományban érzékeny organizmusok, és a sejteket, amelyek úgynevezett mesterek Virology.
Szaporodott sejttenyészetekben vagy szövetekben, 7-13 napos csirke tojás, és laboratóriumi állatok, amelyek közül a leggyakrabban használt fehér egerek, előnyösen 1-4 napos csecsemők, nyulak, szíriai hörcsögök, és görények.
Sejtkultúra - termesztik in vitro (a testen kívül) különleges környezetben, különböző állati és emberi szövetek sejtek, beleértve a fehér vérsejtek, megtartják részesedése, és fogékonyság bizonyos vírusok. A fő követelmény, ha dolgozik, sejtkultúrák és vírusok - a szigorú betartása sterilitás, ami úgy érhető el aszeptikus virológiai boksz.
Termesztésre sejtek (szövetek) különböző táptalajok (199 vagy tű), amely a komplett sor szükséges őket anyagok (aminosav, purinok, pirimidinek, szénhidrátok, vitaminok és mások.) Kiegészítve szarvasmarha szérum.
Sok fajta sejttenyészetek: 1) primer tenyészetben, amely képes 5-10 alkalommal a folyosón; 2) korlátlan átültetett; 3) poluperevivaemye képviselő morfológiailag homogén tüdő-sejtek és humán vese visszatartó áthaladásánál 50 diploid kromoszóma.
Minden ilyen típusú sejteket tenyésztünk hőmérsékleten 36-37 ° C ultratermosztát hozam 5-7 napon belül jó Monorétegképzésre ragasztva a falak a matracok, fiolák és kémcsövek. Ellenőrzik a sejtek növekedését kis nagyítás mikroszkóp, kezdve a 3-4 nap.
Elsődleges sejttenyészetekben. A forrás primer kultúrájának sejtek rendelkeznek nagy potenciájú növekedési madár embrionális szövetek (elsősorban a csirke fibroblasztok), a kísérleti állatok, majmok, de többségük készítünk tripszinezzük szöveti megszakítva 8-14-hetes humán magzatok. Erre a magzati szövet darált ollóval apró darabokra 2-4 mm és 2-3-szor mossuk szabad a vér Hanks-féle pufferolt sóoldat, amíg a folyadék majdnem átlátszó.
Ezután, a megsemmisítése extracelluláris mátrix szövet darab öntsünk melegítjük 32-37 ° C-on 0,25% -os tripszint és egy keverőt elektromágneses keverővel szuszpenziót keverjük 10-30 percig. Első részét tripszinezett sejteket eltávolítottuk. Alkalmas sejtek tenyésztésére vírusok után kapott ismételt tripszinezéssel. További sejt-tartalmú folyékony szétválasztani a nagy csomókat a szövet és a kötőszöveti rostok átszűrünk, centrifugáltuk 800-1000 r / perc 5 percig. A felülúszót dekantáljuk, a csapadékot mossuk Hanks-oldat, és a tápközeggel hígítjuk 199 (vagy tű), így 1 ml-100 000-400 000 sejt. Sejtszuszpenziót szétosztottuk 1 ml-es ampullákba, vagy 20-100 ml-es üveg matracok, szorosan lezárjuk gumidugóval és inkubátorba helyezzük 37 ° C-on Matracok vannak elrendezve egy vízszintes helyzetben, és a csöveket -under szög 5-10 ° speciális tálcák. Csatolása az üveg sejt néhány napig alkotnak egy egyrétegű.
Folyamatos sejttenyészetben. Ez stabil, vagy, ahogy gyakran nevezik, immortalizált (halhatatlan) sejtvonal, önállóan replikálódó, mint a baktériumok. Előállítva a normál humán szövetekben (amnion - FL, A-0, A-1; Vese - Rh, 1SHCH, diploid sejtek); állatok és rosszindulatú daganatok (matki- nyaki HeLa, gége (majomvese - - Vero, MS, BSC-1 PC és szaruhártya -SIRK nyúl vese) - HEp-2, orális - KB, humán csontvelő - D-6 et al.), amelyeket művelt, egymást követő részeket táptalajon már évtizedek óta.