Staphylococcus spp. Érzékenységének meghatározása
A Staphylococcus spp. Érzékenységének értékelése során Mindenekelőtt meg kell vizsgálni a fő klinikai jelentőséggel bíró készítményeket: béta-laktámok, makrolidok, fluorokinolonok, aminoglikozidok és vankomicin.
A Staphylococcus spp. Érzékenységi vizsgálat eredményeinek értelmezésére vonatkozó kritériumok (a növekedési gátlási zónák átmérőjének határértékei és az ABP MIC értékei) a 14. táblázatban találhatók.
A béta-laktám
Drugs of választás a staphylococcus-fertőzések kezelésére (által okozott, mint a Staphylococcus aureus, és a staphylococcusok koagulazanegativnymi) béta-laktám antibiotikumok, így, először arra van szükség, hogy meghatározzuk az érzékenységet a Staphylococcusok, hogy a gyógyszerre.
A staphylococcus-rezisztencia a béta-laktam-bázissal szemben Bp-laktamáz termeléssel vagy egy további penicillinkötő protein-PSB2a jelenlétével társul. E két rezisztencia-mechanizmus azonosítása és differenciálódása lehetővé teszi az összes béta-laktám antibiotikum aktivitásának megbízható megjósolását anélkül, hogy közvetlenül értékelné az egyes gyógyszerekre való érzékenységet. Ebben az esetben a következő mintákat kell figyelembe venni:
- A Staphylococcus spp. az ellenálló mechanizmusok érzékenyek minden béta-laktám ABP-re.
- Béta-laktamáz (penicillináz) Staphylococcus spp. képesek a természetes és félszintetikus penicillinek hidrolizálására, kivéve az oxacillint és a meticillint. Érzékenység vagy ellenállás benzilpenicillin indikátora a tevékenység természetes és félszintetikus amino-, karboxi- és a ureidopenitsillinov. A maradék béta-laktámok egy potenciális antistaphylococcal aktivitást (antistaphylococcal penicillinek, cefalosporinok I, II és IV generációk és karbapenemek) aktivitás megtartása elleni béta laktamazprodutsiruyuschih törzsek.
- Staphylococcus spp, amelynek PSB2a klinikailag rezisztensek az összes béta-laktám ABP. A PSB2a jelenlétének markere oxacillinnel és meticillinnel szembeni ellenálló képesség. Az ilyen törzseket meticillin-rezisztens történelmileg staphylococcusok (meticillin-rezisztens Staphylococcus spp -MRSS). Egyéb kifejezések leírására az ilyen törzsek MRSA - meticillin-rezisztens S. aureus és MRSE - meticillin-rezisztens S.epidermidis.
- A meticillin jelenleg nem használják a klinikai gyakorlatban, és a laboratóriumi diagnosztika, szinte teljesen kiszorították oxacillint, illetve megalkotta a „oksatsillinorezistentnost”, azaz a teljes szinonimája a „meticillin”.
Így a Staphylococcus spp. A béta-laktámot az ABP-nek tartalmaznia kell két teszt elvégzését:
- A benzilpenicillinnel szembeni érzékenység meghatározása vagy a béta-laktamáz (penicillináz) termelésének kimutatása.
- Az oxacillinnel szembeni érzékenység meghatározása vagy a PSB2a vagy annak kódoló génjének kimutatása mecA.
A benzilpenicillinnel szembeni érzékenység meghatározása vagy a béta-laktamáz (penicillináz) kimutatása
Staphylococcus spp. Érzékenysége a benzilpenicillin némileg bonyolítja az a tény, hogy a szintézis a béta-laktamáz egy mikroorganizmus, amely indukálható folyamat (termelés az enzim fokozott expozíció után az antibiotikum). Ennek eredményeként a soros hígítások és a DDM szabványos módszerei segítségével hamis érzékenységet lehet elérni.
E probléma megoldása lehet a béta-laktamázok közvetlen detektálásának módszere, amely a nitrocefint tartalmazó lemezek használatán alapul. A nitrocefin egy kromogén cefalosporin, amelyet minden béta-laktamáz könnyen hidrolizál, hogy színes terméket kapjunk.
staging vizsgálat
A vizsgálat elvégzéséhez egy csészét használtunk, amelyen a Staphylococcus spp. penicillin és / vagy oxacillin DDM. A lemez oxacillinnel való növekedésének gátlási zónájának határaitól a bakteriológiai hurok kis mennyiségű tenyésztést tesz lehetővé, és nitrocellinnal előmelegített lemezre alkalmazzák. A lemezt szobahőmérsékleten 1 órán keresztül inkubáljuk.
Az eredmények értelmezése
A vörös festés megjelenése jelzi a vizsgált mikroorganizmus törzsének a béta-laktamázok termelését.
A béta-laktamázt termelő törzs természetes és félszintetikus penicillinek (az oxacillin kivételével) ellenállónak tekinthető, függetlenül a felsorolt ABP specifikus vizsgálati eredményeitől.
Oxacillinnel szembeni érzékenység meghatározása
Az oxacillin érzékenységének standard módszerekkel történő meghatározásakor bizonyos jellemzőket figyelembe kell venni:
- az inokulum előállítására csak a telepek szuszpendálására szolgáló közvetlen módszert alkalmazzák;
- Az oxacillinnel szembeni érzékenység meghatározásának eredményeit figyelembe vevő inkubáció időtartama legalább 24 óra legyen.
A DDM tesztelés jellemzői
- 1 μg oxacillint tartalmazó lemezeket kell használni.
- Az eredményeket figyelembe véve figyelmet kell szentelni a növekedési gátló zónában észlelt staphylococcusok egyetlen kis telepének is.
A tesztelés jellemzői soros hígítási módszerekkel
- Ajánlatos NaCl-t (2% végső koncentrációig) adni a tápközeghez.
A staphylococcusok oxacillin vizsgálatának eredményeinek értelmezése
- Az oxacillinnel szemben ellenálló staphylococcusok törzseit úgy kell tekinteni, mint amelyek minden béta-laktám ABP-nek ellenállóak.
- Meghatározása eredményeit Staphylocossusok oxacillint fogékonyság más béta-laktám ABP eltérőek lehetnek, és az érzékenység a oxacillint meghatározóak.
- A staphylococcusok béta-laktámra vonatkozó ABP érzékenységének meghatározása - a benzilpenicillin és az oxacillin kivételével - nem megfelelő.
- A meticillin-rezisztens staphylococcusok esetében a többi csoport ABP-vel szembeni rezisztenciája jellemző. A többszörös rezisztencia kimutatása a staphylococcusokban az oxacillinnel szembeni érzékenységgel szemben ismételt vizsgálatokat igényel.
- Figyelmet kell fordítani a S. aureus és a koaguláz-negatív staphylococcusok meticillin-rezisztenciájára vonatkozó különbségekre.
- Kétséges eredmények elérése érdekében további módszereket kell alkalmazni (agaron végzett szűrés - az alábbi módszer, a mecA gén közvetlen kimutatása vagy a PSB2a fehérje).
A vizsgálati eredmények és a kezelési javaslatok átadása a klinikusoknak
- A penicillin és a meticillin-érzékeny staphylococcusok törzsek izolálásakor a mikroorganizmus érzékeny minden béta-laktam-bázisra, és a választott gyógyszerek természetesek és aminopenicillinek.
- Az azonosító a termelés a béta-laktamáz, és az érzékenység oxacillin mikroorganizmus hogy ellenáll a természetes penicillin, amino-, karboxi- és ureidopenitsillinam, de érzékeny a oxacillin, a penicillin és a cefalosporinok ingibitorozaschischennym I - II generációs, amelyek a választott hatóanyagokkal ebben az esetben. Amint szemben is hatásosak cefalosporinok IV generációs adatok törzsek és karbapenemek azonban előnyö-sebb, a választott hatóanyagokkal, nem rendelkeznek.
- Meticillinrezisztencia kimutatása esetén a törzs ALL-béta-laktám antibiotikumokra rezisztensnek tekinthető, a kezeléshez más csoportok készítményeit kell alkalmazni, amelyek közül a glikopeptideket a választott gyógyszernek tekintik.
További módszerek a meticillin rezisztencia kimutatására
A staphylococcusokban a meticillin rezisztencia kimutatására a legmegbízhatóbb módszer a molekula genetikai módszerekkel (polimeráz láncreakció - PCR) való közvetlen meghatározása a mecA gén jelenlétében. Ezenkívül kereskedelmi módszert fejlesztettek ki további penicillinkötő fehérje - PSB2a kimutatására az agglutinációs reakcióban.
Ugyanakkor, a szűrés a agar kimutatására meticillin nagyon érzékeny és specifikus, könnyen kivitelezhető a rutin mikrobiológiai laboratórium munka, de ez csak akkor használható, a S. aureus törzsek.
staging vizsgálat
A szűréshez 4% NaCl-t és 6,0 ng / ml oxacillint tartalmazó Müller-Hinton agarlemezeket állítunk elő. Nátrium-kloridot adunk hozzá a tápközeghez az előírt mennyiségben az autoklávozás előtt. Az oxacillin munkaoldatát hozzáadjuk a tápközeghez az autoklávozás és a tápközeg 45-50 ° C-os hűtése után. Az oxacillin munkaoldatának elkészítéséhez ismert aktivitású ABP anyagot használnak.
A mikroorganizmus-szuszpenziót kell készíteni csak közvetlen szuszpenziós több izolált telepeket az azonos típusú aureus termesztett nem-szelektív tálat tápanyag agar steril sóoldatban, és hogy a zavarossága 0,5 McFarland (1,5 x 10 augusztus CFU / ml).
oltás
Két módszert alkalmazhatunk az agarlemezek beoltására: mikropipett használatával vagy steril pamut törlővel.
I. módszer (mikropipetta)
- előállítunk egy 1: 100 hígítású standard inokulumként megfelelő szabványos zavarossága 0,5 McFarland, hogy kapjunk baktérium szuszpenziót tartalmazó 1,5 x 10 június cfu / ml (például, adjunk hozzá 0,1 ml standard szuszpenziót 9,9 ml steril fiziológiás oldat);
- Mikropipetta segítségével 10 μl hígított standard szuszpenziót töltsünk fel az agar felületére oxacillinnel.
A II. Módszer (tampon alkalmazásával)
- steril vattacsomót mártott egy kémcsőbe egy standardizált szuszpenziót (0,5 McFarland on), majd kinyomjuk a felesleges nedvességet oldalán a cső;
- A tenyészetet egy tollal vagy egy korlátozott felületen (10-15 mm átmérő) vagy az agar teljes felületén oxacillinnel, Petri-csészében alkalmazzuk.
Az S. aureus törzseket 35 ° C-on 24 órán át inkubáljuk, és a koaguláz-negatív staphylococcusokat 48 órán át inkubáljuk.
Jövedelmezőségi elemzés
Az inkubálás után a csészéket gondosan átvizsgálják az átvilágított fényben:
- a tenyészet helyén több mint 1 telep vagy üres növekedés látható növekedése azt jelzi, hogy ez a törzs oxacillinre (meticillinre) való rezisztenciája;
- hiányában a növekedés az alkalmazás helyén a kultúra törzs analizáltuk számít érzékeny meticillin (oxacillin).
- megkérdőjelezhető eredmények, valamint a törzsek betegekből izolált klinikai szívelégtelenség és súlyos fertőzések, szükséges, hogy készítsen részletes tanulmányt a meghatározását MIC oxacillin, és a mecA gént.
minőség-ellenőrzés
- A vizsgálat során a szükséges növekedési kontroll vizsgált tenyészetekben a Muller-Hinton-agart, 4% nátrium-klorid nem oxacillin (kultúrát alkalmazunk, valamint agar oxacillin).
- Ezzel párhuzamosan a teszt és a kontroll törzset vizsgáltunk: S. aureus ATCC 38591 - rezisztens; S. aureus ATCC 29213 - érzékeny.
Makrolidok és linkozamidok
Makrolidok és linkozamidok alternatív gyógyszerek a staphylococcus-fertőzések kezelésére. A vizsgálatnak ki kell terjednie:
- Egyik képviselője a 14-és 15-tagú makrolidok. Fejezze közötti kereszt-rezisztencia egyes képviselői.
- Klindamicin. Komplett közötti kereszt-rezisztencia a 16-tagú makrolidok és a linkozamidok.
A fenti kábítószerek választéka határozza meg törvényei kereszt rezisztencia jön létre ezen antibiotikumok alcsoportok.
fluorozott kinolon-
Az utóbbi időben megnövekedett érdeklődés a fluorokinolonokkal, mint gyógyszerek a staphylococcus-fertőzések kezelésére (különösen a bőrön és a lágy szövetek). Az új képviselői ennek a csoportnak ABP (antipnevmokokkovye fluorokinolonok -. Levofloxacin, sparfloxacin, moxifloxacin, stb) rendelkeznek szemben fokozott aktivitással Staphylococcus spp. mint a hagyományos gyógyszerek. Ezek között alcsoportok gyógyszerek nem teljes kereszt-rezisztencia. Antipnevmokokkovye készítmények gyakran elleni aktivitásának fenntartására törzsek rezisztensek más fluorokinolonokkal.
aminoglikozidok
A gyakorlatban ez szükséges figyelembe venni néhány jellemzője az értelmezést kapott eredmények in vitro. Így, a rezisztencia kimutatására, hogy a gentamicin izolált törzs kell tekinteni ellenáll minden aminoglikozidok. Ebben a tekintetben, gentamicin szerepelnie kell a vizsgálati rendszer kötelező. Ugyanakkor ez lehet rendkívül ritka törzsek rezisztensek más aminoglikozidokkal érzékenységével gentamicin.
vancomycin
A vankomicin egyik választott hatóanyagokkal (együtt oxazolidinon) kezelésére által okozott fertőzések törzsek oksatsillinrezistentnymi. Üzenet jelenik meg a stabilitását staphylococcus glükopeptidekkel figyelmet igényel az értékelés a kutatási eredményeket.
további termékek
Oxazolidinonok fontos előrelépést kezelésében által okozott fertőzések törzsek oksatsillinrezistentnymi, beleértve azokat, amelyek rezisztensek glikopeptidek. Ugyanakkor, azt kell szem előtt tartani, amit már ismert a rezisztencia kialakulását antibiotikumokkal ennek a csoportnak.
más gyógyszerek
- Co-trimoxazole.
- Klóramfenikol.
- A fuzidinsav.
- Tetraciklinek.
- A rifampicin.
Az értéke ezeknek a gyógyszereknek a staphylococcus-fertőzések kezelésére törzsek által okozott metitsillinchuvstvitelnymi kicsi, mivel ezek rosszabb a béta-laktámok. A klinikai hatékonysági által okozott fertőzések törzsek oksatsillinrezistentnymi, kevéssé ismert.
A rifampicin, kotrimoxazol és fuzidinsav önmagában nem ajánlott, mint a szelekció eszközeként nagyfrekvenciás rezisztencia kezelés során.
Létrehoz egy konkrét antibiotikumok, hogy értékelje az antibiotikum érzékenységét staphylococcus legmegfelelőbb alapján a gyakorisági eloszlását adatok a kórházban meticillin. Hiányában vagy alacsony frekvenciájú metitsillinrezistentnye elegendő, hogy esetükben az érzékenység értékelését, hogy oxacillin (szempontjából felügyelet), makrolid és talán még egy 1 - 2 szerek ténylegesen használni egy adott kórházban a staphylococcus-fertőzések kezelésére. Abban az esetben, nagyfrekvenciás terjedési metitsillinrezistentnye tanulmányok tartalmaznia kell egy meglehetősen széles körű antibiotikumok.
Általános információk és kereskedelmi
Információ a tudományos jellegű
- Ureaplasmosis: diagnózis, kórokozók, megelőzése - modern megjelenés
- Modern módszerek a antibiotikum érzékenységi
- Laboratóriumi diagnosztikája gonorrhoea
- Modern laboratóriumi diagnosztika tüdőbajban
- Mycoplasma diagnózis: most egyszerűen és olcsón
- Antibiotikumok kezelésére ureaplasmosis és Mycoplasma
- Kromogén táptalaj
- Laboratóriumi módszerek diagnosztizálására urogenitális trichomoniasis (szakirodalom)
forgalmi engedélyének
- Egy sor lemezek, hogy meghatározzuk érzékenység antimikrobiális rezisztencia - 1 (ND-MSP-1)
- Reagens készletet „eritrocita diagnosztikum kanyaró antigén száraz passzív hemagglutináció (PHA)”
- Reagenskészlet vizuális észlelését Mycoplasma hominis (Mycoplasma-50)
- Reagenskészlet vizuális észlelését Ureaplasma urealyticum (Ureaplasma-50)
FBUN Institute of Epidemiology
és Mikrobiológiai Pasteur
Department of New Technologies