A célra és izolálására szolgáló eljárások tiszta tenyészeteket - mikrobiológia és virológia
A célra és izolálására szolgáló eljárások tiszta tenyészeteinek
Tiszta tenyészet hívják kultúra, amely mikroorganizmusokat tartalmaz egy faj [7. 64].
Izolálása tiszta tenyészeteinek baktériumok - egy szükséges lépése bakteriológiai kutatás laboratóriumi diagnózisa a fertőző betegségek, a tanulás különböző mikrobiális a környezet szennyezésének és általában, bármelyik munka mikroorganizmusok [7. 64].
A vizsgálati anyag (genny, köpet, széklet, vér, és egyéb anyagokat a betegek, a víz, talaj, levegő, élelmiszer, állat és humán hullák, vektorok) általában tartalmaz baktériumokat Association.
Izolálása tiszta tenyészet lehetővé teszi számunkra, hogy tanulmányozza a morfológiai, tenyésztési, biokémiai, antigén és egyéb funkciók szerint az összessége, amelyek által meghatározott fajtájú és típusú tagság a kórokozó, hogy az előállított, annak azonosító.
Izolálására tiszta tenyészeteinek mikroorganizmusokat alkalmaznak technikákat lehet osztva csoportokra [7. 64].
Módszer Pasteur - sorozathígítást a vizsgált anyag a folyékony tápközegben koncentrációra egy cella térfogatban (történelmi jelentőségű).
Koch módszere ( „huzalozás lemez”) - egy soros hígításban levő vizsgálandó anyagnak az olvadt agar (hőmérséklet 48-50 ° C), majd azt megtöltjük egy Petri-csészébe, ahol agar megszilárdul.
Vetés teszi, mint általában, a három vagy négy utolsó hígítás, ahol a baktériumok lecsökken, és a jövőben a növekedés Petri-csészék jelennek izolált telepeket kialakítva az egyik az eredeti anyasejt. Az izolált telepekből származó, a mélysége a agar tiszta a baktérium kultúrák friss reseeding környezetre.
Shukevich módszer - használt tiszta tenyészetek kinyerése a Proteus és más mikroorganizmusok is „lopakodó” növekedés. Vetés a vizsgálati anyag előállításához kondenzvíz alján a ferde. Mozgékony baktérium (Proteus) képesek járni a ferde tenyészetet, továbbra is növekszik az alján a formában az oltás helyén. Tenyésztése felső szélei a tenyészet kaphat egy tiszta tenyészet.
Módszer Drigalski - széles körben használják a bakteriológiai gyakorlatban, a vizsgálati anyag hígított egy kémcsőben steril sóoldattal vagy húsleves.
Egy csepp első anyagot vezetünk be a csészét steril üveg spatulával és elterjedése a felület felett a közeg. Ezután ugyanazt a spatula (nem átégetve be az égő láng), hogy ugyanazt a termény a második és a harmadik lemez. Minden egyes beoltás baktériumok a spatulával egyre kevésbé, és a sejteket a harmadik csésze, a baktériumok lesz elosztva a felszínen a táptalaj egymástól elválasztva.
1-7 nap. tartóperselyek egy kemencében (attól függően, hogy a mikroorganizmus növekedési ütem) a harmadik csésze ad minden baktérium-sejt-klónt izoláltunk kolóniaképző amelyek átoltjuk ferde agar annak érdekében, hogy felhalmozódnak a tiszta tenyészet.
Különös nehézségek merülnek fel a kiosztási tiszta tenyészetek obligát anaerob. Ha molekuláris oxigénnel nem okoz azonnali halálát a sejtek, a termés szerinti eljárással előállított a Drygalski, de ezután azonnal egy csésze Anaerob. Azonban a legtöbb nemesítési módszer. Ennek lényege abban a tényben rejlik, hogy a hígítás az anyag végezzük olvadt és lehűtjük 45-50 ° C-agar táptalajon.
Hígítási sorozatot készítünk a 6-10, majd a közeget a csövekben gyorsan lehűtjük, és felületi réteg keverékéből paraffint és vazelinolajat annak érdekében, hogy megakadályozzák a behatolást a levegőt a belső a tápközeg. Előfordul, hogy a táptalaj a beoltás után, és a keverést átvisszük egy steril csőben vagy kapilláris Burri Pasteur-pipettával, amelynek a végeit lezárjuk.
Ha sikeres tenyésztés a csövekben, a csövek Burri, Pasteurpipetta anaerob nőnek izolált telepeket.
Felhasználási táptalaj, egyértelművé tette, hogy az izolált telepek jól látható. A kivonat izolált telepeket anaerobok csövet enyhén melegítjük forgatva a lángban, agar, a faiak mentén, és a cső tartalmát megolvad, mint az agar oszlopban befér egy steril Petri-csészébe. Az oszlopot agar vágjuk steril csipesszel, és távolítsa el a kolónia hurok. Az extrahált kolóniákat helyezünk a folyékony közegbe, kedvező a mikroorganizmusok fejlődését kiosztott (például, Kitty Tarotstsi közepes). Agar táptalaj fújt a cső Burri, ezt a gázt átvezetik egy vattadugón.
Hungate módszer - ha azt akarják, hogy izolált telepeket a baktériumok, különösen magas a oxigén iránti érzékenységet (szigorúan aerob) módszerével forgó csövek Hungate.
Ehhez az olvasztott beoltott agar táptalajon a baktériumok állandó áram a csövön keresztül inert gáz megszabadítjuk az oxigén szennyező. A csövet ezután lezárjuk, egy gumi válaszfallal és vízszintesen kell elhelyezni egy bilincs, a cső forgatásával, a közeg így egyenletesen oszlik el a falak, a cső és a vékonyréteg megszilárdul. Alkalmazása egy vékony réteg egy cső töltött gázkeverékkel lehetővé teszi, hogy izolált telepeket kapjunk jól látható, hogy a szabad szemmel.
Izolálása egyedi sejtek alkalmazásával mikromanipulátorral. Micromanipulatorral - olyan eszköz, amely lehetővé teszi, hogy Mikropipetta vagy különleges mikropetli eltávolítása egy cellában a hígtrágya. Ez a művelet ellenőrzött mikroszkóp alatt. A szakaszban a mikroszkóppal nedvességtartalmú kamrában, amelyben a gyógyszer van elhelyezve „függő csepp” [7. 70].
A tartók működő állványokhoz rögzített mikropipetta (mikropetli), amelynek mozgása az a látómezőben a mikroszkóp készült mikronos pontossággal rendszernek köszönhetően a csavarok és a karokat. Kutató keresi egy mikroszkóp, egyedülálló sejtek mikropipetták beolvassa, és továbbítja azokat tartalmazó kémcsövekbe steril folyékony közeget szerezni sejtklón.
Az alapvető módszer egy bakteriológiai módszer, amely magában foglalja a szétválasztása a tiszta tenyészet a kórokozó (lakosság baktériumokat tartalmazó egyik típusú) és azonosítását is.
Az azonosító mikroorganizmusok magában foglalja a vizsgálat tulajdonságaik megállapítása érdekében tagság egy adott rendszertani csoport (kor, átlag).
Bakteriológiai módszer egy többlépcsős tanulmány. Annak a ténynek köszönhetően, hogy a vizsgálati anyag gyakran tartalmaz egy olyan keverék mikroorganizmusok alapján bakteriológiai módszer izolálását tiszta tenyészetét a patogén, amely előállított első szakaszában a kutatás. Erre a célra, hogy ültetés a vizsgálati anyag, általában szilárd táptalajon, amelynek megválasztása határozza meg a tervezett ingatlan a kórokozó.
Alkalmazott lehetséges választható közegben, amely növekszik csak a baktériumfajok, vagy differenciál diagnosztikai környezetben különbséget szándékolt kórokozó más mikroorganizmusok.
Például, izolálására diftéria Bacillus telluritovye alkalmazási környezetben, amikor bakteriológiai diagnózis bélfertőzések - Endo közegben, bizmut-szulfit agar.
Elosztása során opportunista patogének termény előállítására egy univerzális tápközeg, mint például a vér-agar. Minden manipulációk kapcsolatos vető és szigetelő baktériumtenyészetek, végzik az égő láng.
Termény táptalajon termelnek egy bakteriális hurok vagy üveg vagy fém spatula úgy, hogy eloszlassa az anyagban vannak baktériumok tápközegben felületre, ahol mindegyik baktériumsejtben esik egy részét a közeg. Amikor tiszta tenyészetét izolálását a kórokozót a kórbonctani anyag nagyrészt a szennyezett külső mikroflóra, néha használja biológiai izolálási módszer kidolgozása, a tiszta tenyészet: vizsgálati anyag érzékeny a patogén Infect laboratóriumi állatok.