Laboratóriumi törzskultúrák (LMC)
Bármilyen Laboratory replikáció micélium alapján kell laboratóriumi törzskultúrák. Úgy gondoljuk, hogy ez elfogadhatatlan, hogy összekapcsolják egy és ugyanazon helyszínen és replikációs micélium oltóanyag előállítását az anya.
A laboratóriumban törzskultúrák következő feladatokat látja el:
• tárolása és fenntartása a gyűjtemény tiszta tenyészetek;
Gyártása • oltóanyagot replikáció szempontjából;
• ellenőrzési szár növények tiszta és morfológiai paramétereit kultúra.
A gyűjtemény a tiszta tenyészetek - a legfontosabb, hogy mi van egy ilyen laboratórium. Megőrzése szár nyers törzskultúrák - LMC fő feladat, hiszen minden kultúrában, tárolt helyi laboratóriumban elő csere, vásárlás, vagy vegetatív izolálása termőtestek. Ez azt jelenti, hogy egyetlen laboratórium az Ukrajna és Oroszország nem (jelenleg) törzskultúrák igaz hibridek. Igaz kapott hibridek keresztezésével két fajta vagy fajták és vad törzs. Eljárás fajták tulajdonosa és «know-how», melyet az a cég, és frissítse a hibrid csak a cég, amely nem kapta meg és az eredeti szülő formában, hogy kiemelje.
A hibridek általában nagyon instabil, ezért vásárolt hibridek igényel szakmai megközelítés a karbantartás és tárolás. Ha képzett tárolása és karbantartása törzskultúrák őssejtek jellegzetessége miatt genetikai jellemzői osztályba kell maradnia.
Adathordozója tiszta tenyészetek
A fő cél az elérni kívánt optimalizálása során a készítmény a média tárolására alkalmas - a legnagyobb lassú anyagcsere-folyamat, és ezáltal a növekedési kultúra. Ugyanakkor a környezet nedvességtartalma olyannak kell lennie, hogy az év során nem teszi részeket miatt szárítás.
Tiszta tenyészeteket tárolt kémcsöveket agar táptalajon (ábra. 1). Agar - poliszacharid származó bizonyos fajtáinak a hínár. Ez nem egy tápanyag és csak arra szolgál, hogy lezárja a közeg. A vizes agart megolvasztjuk hőmérsékleten 80-100 ° C, megszilárdul 40-45 ° C-on
Ábra. 1. kémcsövek agar táptalajon
Íme néhány recept táptalaj:
• burgonya-glükóz-agar (g / l):
hámozott és apróra vágott burgonyagumó - 200 g
agar - 15-20 g (vagy agaroid 35-40g)
neohmelennoe cefre - 250 ml (0,25 L)
agar - 15-20 g
Wort húsleves lehet helyettesíteni a gabonafélék.
Hogy előkészítse a burgonya-glükóz tápközegben burgonyagumókban forraljuk, amíg a főtt a fermentlevet leszűrjük, a szürlet térfogatát 1 literre. Add glükóz agar. A közeget melegítjük, amíg teljes megolvadása az agar.
A készítmény a sörcefre Wort agar táptalaj pH kell lennie a tartományban 4-4,5.
Micéliumok laskagomba, Agaricus bisporus tartjuk jól olyan környezetben, ahol a mag alkalmazása húsleves táptalajon, amely szükséges összes alkatrészt a növekedés a kultúra helyett cefre.
Kapott közeget öntjük kémcsövekbe (20x200 mm) 10 ml. A csöveket lezártuk pamut-géz dugók. A dugót kell lennie a nyak a cső kétharmada a hossza, nem túl szűk, de nem szabad. Olajfolt kell győződnie arról, hogy a környezet nem nedvesített széle a cső, vagy lehet ragaszkodni a dugót. A Petri-csészéket öntjük 15 ml közegben egyenletesen eloszlatva a csésze alján.
Főtt közepes készek a sterilizáláshoz. Sterilizálja a kémcsöveket a közepes nyomáson 1,5 atm. autoklávban 1 órán át. Ezt követően, a cső olvadt agar táptalaj az autoklávból eltávolítjuk, és helyezzük egy ferde helyzetben, oly módon, hogy a közeg nem terjed túl 2/3 a cső, vagy lehet visszafogja a dugót, ami elfogadhatatlan.
Ha a közeg megkeményedik, a csöveket függőlegesen és hagyjuk szikkadni kondenzátum-víz (petri csészében, ez meg fejjel lefelé).
A steril közeget termosztátba helyezzük 28 ° C-on több napig. Ha a felszínen, és a vastagsága a közeg nem kell jelölni a baktériumok vagy gombák telepeket, közepes tartják steril, és adja át a ültetési növények.
Eltároló eljárást, tiszta tenyészet
Két fő való tárolására szolgáló módszereket szár törzstenyészetek:
• Eljárás vegetatív részeket;
• tárolása folyékony nitrogénben -196 ° C-on
A legmegfelelőbb és megfizethető LMC az első utat.
Az alábbiakban felsoroljuk az alapelveket tárolás, elkerülve a hibrid mutációk a tárolás során a kultúrák:
• optimalizálása alkalmazott táptalajok tárolás;
• A használat kimerült táptalajt;
• Csökkenti a gyakorisága folyosón;
• betartása tárolási körülmények, a lehető legnagyobb mértékben lassítja a növekedést és az anyagcsere (+4 +5 „C-on);
• A használata táptalaj azonos összetételben az egyes egymást követő passzált tenyészet;
Az egyik legfontosabb paraméter a tárolás időtartamát. Köztudott, hogy kevesebb, mint passzált gyűjtemény, a kisebb lehetőségeket teremt eredeti kulturális mutáció. Annak elkerülése érdekében, a gyakori részeket összege minden egyes tárolására egy törzsének egységeket kell tartania legalább egy évig.
Tárolás tiszta tenyészeteket vegetatív részek
Ahhoz, hogy a kultúra és a természeti környezet megőrzése gyűjtését végzik a laboratóriumi szubkultúra micélium friss táptalajt. Mivel a periodikus részeket kultúra folyamatosan üzemel, és nyomon követte a tisztaságát.
Tenyésztőcsövekből hozott a bal kéz tenyér egy párhuzamos elrendezése ujjait, és ragaszkodni a hüvelykujját, hogy a kúpos a táptalaj felületén tisztán látható volt. A jobb oldali (a tollal írni), hogy az oltás tű (mikológiai hook), és többször is odavitte az égő lángja a sterilizálás (2A.). Ezután a kisujj és a gyűrűsujj a jobb kéz dugót eltávolítjuk a kémcsövet, és óvatosan a falat hűtés vezetünk be a horog. Horgolt hogy egy kis darab micélium (2B.). A tenyésztő csöveket lezárjuk.
Vegyünk egy cső friss közeggel. Az élek a csőben és a csövet átvezetjük egy láng (ábra. 2c). Szerdán, készítsen egy darab micélium lezárjuk. A csövet a vetés biztosan rögzíti a dátumot az oltás, a törzs száma, a járatok számával.
Ábra. 2. reakcióvázlat Szubkulturázás micélium
Passzált tenyészetet termosztátba helyezzük át 24-26 ° C-on, és ott maradt, amíg a teljes eltömődés tenyészet szubsztrátot. Az első napokban, kívánatos, hogy figyelemmel kíséri a növekedés, mert ebben az időben könnyebb felismerni a szennyezés.
Módszer periodikus szubkultúrák (áthaladásánál vegetatív módszer) a leggyakoribb módszer tárolására gyűjtemény kultúrák. Minél kevesebb van reseeding a gyűjtemény, a kisebb sejtosztódás megy a kultúra és a közelebb a tulajdonságait, hogy az eredeti izolátum. Annak érdekében, hogy ne legyen túl gyakori járatok száma, a tároló egységek olyannak kell lennie, hogy ne kell tennie a további részeket időszakon belül a kultúra rejlik tárolására. Passaged kultúra többnyire nem ajánlatos évente egyszer. Passzált tenyészet tárolható szobahőmérsékleten, de az optimális tárolási növények között a járatok az a hőmérséklet 4-5 ° C-on
Tárolás tiszta tenyészeteket folyékony nitrogénben -196 ° C-on
További információt a tenyészetet folyékony nitrogénben -196 ° C-on, adjuk a „mycologist, gomba targonca Handbook”, Kijev, „Naukova Dumka”, 1987, p. 420-421.
A tárolás előtt micéliumot hőmérsékleten inkubáljuk a +5 ° C-on 1-7 napig. Ezután egy vagy két milliméteres üvegampullában helyezzük 6-8 szemes benőtt micélium, és 0,5 ml dimetil-szulfoxid-glicerin - védő szuszpendáló közegként. Mielőtt fagyasztott fiolák micéliumot szobahőmérsékleten tartjuk egy órán át. Fagyasztás lassan végezzük, a technológia, mely lehetővé teszi a hűtési folyamat. Fagyasztott tenyészetéből folyékony nitrogénben tároltuk hűtőszekrényben egy tempera-160-körben. -196 ° C-on Ahhoz, hogy állítsa vissza a fagyasztott micéliumot ampullákat tartott vízfürdőben 38 ° C-on, amíg az utolsó nyomait eltűnnek jég. Mielőtt megkettőzése a micélium szükséges ellenőrizni életképességét és erejét a növekedés. Úgy véljük, hogy ez a módszer lehetővé teszi, hogy a törzsek sokáig anélkül, hogy jelentős változások a genotípus.
Izolálása tiszta tenyészetek
A gyűjtemény a szár törzskultúrák képesnek kell lennie arra, hogy izolálni tiszta tenyészeteket. A tiszta tenyészetekből izolálni lehet vetőmag a micélium a termőtestek, a csírázását basidiospores. Úgy gondoljuk, hogy annak érdekében, hogy tiszta tenyészeteket hibrid törzsek alkalmasak, kizárólag az első módszer (válogatott vetőmag micélium), mivel csak ez a mód biztosítja a legpontosabb másolata törzs.
Így tiszta tenyészeteit micélium inokulum
Ahhoz, hogy tiszta tenyészeteket az inokulum a micéliumot, nyilvánosságra nem hozott kereskedelmi csomagolás micélium legjobb Plot vizuálisan kiválogatjuk dörzsölte héj alkoholt bemetszést készítünk, és néhány szem csövekbe visszük, egy ferde táptalajon. A teljes eljárást végezzük steril dobozban. A beoltott kémcsöveket inkubáljuk termosztátban hőmérsékleten 24-26 ° C-on Az inkubálás során a napi magatartás mikrobiológiai ellenőrzés. Emlékeztetni kell arra, hogy annak érdekében, hogy kiemelje a kultúra kereskedelmi micélium kell használni csak azok a termékek a világ vezetői a termelés micélium (pl «Sylvan» társaság). Ebben az esetben, akkor kap egy hibrid kultúra az ötödik generáció.
Izolálása tiszta tenyészetek spóratartókat
Ha nincs lehetősége, hogy egy tiszta tenyészete a micélium a vezető gyártók haszongépjármű, kivételes esetekben lehetséges egy tiszta tenyészete termőtest. Izolálása tiszta micelláris tenyészet kell elvégezni a termőtestek a hibrid törzsek. Ehhez válassza ki a fiatal termőtestek ép. Végezzük el a kiválasztás jobb napján gyűjtemény.
Termőtestek helyezzük a szűrőpapírt, és megtörve nyitott a középső (találkozásánál a lábak egy kalap) steril szikével, hogy csökkentsék darab szövet mérete 0,5-1 cm, minden egyes darab steril beoltás tűszúrás, leeresztjük a csésze egy 3-százalékos oldatot néhány másodpercig hidrogén-peroxid, és óvatosan fölött az égő lángja át kémcsövekbe, hogy tápközegben. A csak egy darab minden csövet helyeztünk, ami azért fontos, hogy a fertőzés megelőzésére. Tubes inoculum termosztátba helyezzük hőmérsékleten 24 - 26 ° C-on Két nappal később, darab termőtest csövekben opushayutsya növekvő micélium. A növekedési folyamat végezzük mikrobiológiai ellenőrzést.
Ábra. 3. Az áramkör izolálása tiszta tenyészetek a termőtestek
Izolálása tiszta tenyészeteinek basidiospores
Basidiospores vetés végezhető el közvetlenül a termőtestek által Vries. Gomba sapka csatolt vazelinnel egy belső oldal a fedél üres, steril Petri-csészékben, steril agar táptalajt öntünk 2-3 cm-es rétegben másik csészét fedele van, amely váltakozva 5 percig egy fedél között cserélni. Ez idő alatt a kupa ideje, hogy ott egy pár száz több ezer basidiospores. Minden műveletet végezzük steril szobában vagy egy tiszta padra. Petri lemezeket termosztátba helyezzük hőmérsékleten 24-26 ° C-on Upon csírázását basidiospores folyamatosan termel mikrobiológiai ellenőrzést.
Tisztítása a micélium a külföldi szennyező
Az izolált módon, vagy egy másik kultúra befolyásolni lehet gomba-, élesztők, baktériumok, hogy általában könnyen látható. Ha az elváltozás kicsi, akkor próbálja megtisztítani a kultúrát. Melyben kiválasztott részeit intakt micéliumokat steril beoltás hurkot, és átvisszük egy tiszta környezetben kötelező mikroszkópos ellenőrzés.
Ha szükséges, meg tudod csinálni néhány részeket, annak érdekében, hogy a kultúra valóban tiszta. Mielőtt megkettőzése ilyen kultúra van szükség, hogy ellenőrizze.
Üzleti terv: Termelési gombát. Goremykin VA AY Bogomolov