Vírusizolálás sejttenyészetben

Sejtkultúrák alkalmasak izolálására legtöbb állati vírusok.

Ebből a célból, mint az elsődleges tripszinizáljuk és átültetett és diploid sejttenyészet.

A sejttenyészet fertőzése a következők szerint végeztük. A tubusból vagy matrac egy sejtréteg nőtt a növekedési táptalajt eltávolítjuk, a sejt monoréteg lemossuk a tápközeg (ez lehet egy antitest, hogy a teszt-vírus és a nem-specifikus inhibitorai) Hank-féle oldatot és az így vírust tartalmazó anyagot. Az érintkezés után (1-1,5 óra) szükséges a vírus adszorbeálódott a sejteken, vírust tartalmazó anyagot eltávolítjuk, és az alátámasztó közeg, amely nem elősegítik a sejt proliferációját, de biztosítja a életfunkciók. A csöveket és matracok behelyeztük egy inkubátorba inkubálás. Adsorb a sejtek vírus részecskék behatolnak a sejtek reprodukálható, és menjen ki a tenyésztő folyadékban, megfertőzi az új sejtek, akkor a következő, és így addig, amíg már nem élő sejtek.

Detect a vírust a sejtek lehetnek a következő módszerek (vagy attribútumokat):

1) a citopátiás hatás (CPE), vagy citopátiás hatást (CPE). CPD - bármilyen változás a sejtek hatása alatt a tenyésztés egy vírus. Kimutatására szolgáló CPE fertőzött sejttenyészetet nézve kis nagyítás fénymikroszkóppal. CPP formák nagyon változatos lehet, attól függően, hogy a biológiai tulajdonságai a vírus, sejtek típusa, a fertőzés dózis, tenyésztési körülmények, stb Egyes vírusok mutatnak CPE után 2-3 nappal a fertőzés után (enterovírusok), a másik - .. 1-2 hét (adenovírusok ). A legtöbb jelentősen eltérnek három formában CPP: töredezettség, sejt kerekítés simplastobrazovanie.

Töredezettsége - megsemmisítése sejtek egyedi fragmensek (vezikuláris stomatitis vírus, stb).

Kerekítés - sejtek felveszik a gömb alakú, és el vannak választva az üveg (adeno-, pikornavírusok et al.).

Simplastobrazovanie - óriássejtek: citoplazmájában szomszédos sejtek leszívatjuk való oldása miatt a sejtfalak és a forma egy nagy ketrecben sok kristálymag (PG-3 vírus, marhavész et al.);

2) annak segítségével sejttenyészetben lehet mutatni néhány vírusok hemagglutinációs tulajdonságai: PG-3 vírusok, influenza és más reakció gemadsorbtsii .. Gemadsorbtsiey úgynevezett adhéziós (adszorpció) a vörös vérsejtek felszínén sejtek fertőzött a vírussal. Ezt a módszert széles körben használják a diagnózis PG-3 szarvasmarha használata közben tengerimalac vörösvérsejtek;

3) A módszer kialakulását „plakkok”. Ez a módszer azonban műszakilag bonyolultabb, mint a többi, és főleg a titrálási vírusok és klónozás;

4) kimutatása a vírus RIF. Abban az esetben, ha a vírusok szaporodását sejttenyészetben, nem kíséri citopátiás hatás gemadsorbtsiey, jelenléte alkalmazásával detektálható fluoreszcens antitestekkel. Ezt a módszert széles körben használják a diagnózis a klasszikus sertéspestis, parvovírus fertőzés, a veszettség, stb.;

5) immunperoxidáz reakciót;

6) detektálásával intracelluláris zárványok. Detektálásához zárványok szervek sejttenyésztő növesztünk fedőlemezeken kémcsövekbe helyeztük, beoltjuk a vizsgálati anyag és egy bizonyos inkubációs idő (37 ° C), a poharat mossuk, fixáljuk és különböző technikákkal (hematoxilin-eozin, akridin-narancs, stb). .

Tenyésztési vírusok sejttenyészetekben részben vagy teljesen (mértékétől függően a sejtfeltárás) található egy folyékony tápközegben, amely a használt kész szuszpenziót a vírus. Ha nem minden szaporítósejteket eredményeként megsemmisült szorzás a vírus őket, majd elpusztítja őket 2-3 alkalommal a fagyasztás és felolvasztás, vagy ultrahangos kezeléssel.

Oszd meg barátaiddal