Meghatározási módszere a vírus titer egységekben 50% fertőző fellépés
Ez a módszer több egyetemes. A vírus mennyiségét (vírustitert) az így mért 50% -os hatásos dózist - ED50.
1 ED50 = adag vírus, amely okozhat a fertőző hatást 50% A beoltott vizsgálati tárgyakat.
Minden egyes kiválasztott vírus érzékeny a vizsgálati tárgy - laboratóriumi állatok (rendszerint fehér egerek), embrionált tyúktojásokban vagy sejttenyészet. A fertőző vírus hatást vagy hatásokat a különböző vizsgálati rendszerek megnyilvánulhatnak halált, a klinikai tünetek és a változások pathoanatomical citopátiás hatást. A laboratóriumi állatok és csirke embriók hatása a vírus becslések szerint a halálos és fertőző dózis:
1 LD50 - a dózis a vírus, amely 50% -át elpusztítja laboratóriumi állatok;
I ELD50 - a dózis a vírus, amely 50% -át elpusztítja csirkeembriókból;
1 ID50 - a dózis vírus okozza a klinikai tünetek vagy a patológiás változásokat 50% fertőzött laboratóriumi állatok;
EID50 1 - egy adag a vírus okozza a patológiás változásokat 50% fertőzött csirke embriókból.
A sejttenyészet hatása a vírus értékeljük citopátiás hatás, vagy a hatás (CPE)
TSPD50 1 - egy adag a vírus okozó citopatikus hatás 50% a kémcsövek a fertőzött sejttenyészet.
Száma ED50 (LD50 ELD50, ID50, és TSPD50 EID50) vírus egységben foglalt térfogatú vírus-tartalmú anyag kifejeződése titer a vírus ebben az anyagban. Így a rögzítés T = 103,48 TSPD50 / 0,1 ml azt jelenti, hogy minden egyes 0,1 ml vírus-tartalmú anyagot tartalmazza 103,48 dózisokban, amelyek mindegyike okozhat citopatikus hatás 50% kémcsövek a kultúra sejtek.
Vírustitrálást, 50% fertőző intézkedés alkalmas szinte bármilyen vírustitrálást, ha felveszi az érzékeny rá az élő vizsgálati rendszerben. A hátránya az összetettsége, hosszas időtartama és szükségességét a statisztikai számításokat.
Meghatározási módszere a vírus titer egységekben 50% fertőző fellépés (LD50 ELD50, ID50, EID50 és TSPD50), hogy megtaláljuk a hígításban levő vizsgálandó vírus-tartalmú anyag mennyiségének fertőző dózis, amely tartalmazhat egy ED50 majd kiszámítja, hogy hány ilyen egységek a vírust tartalmazza az azonos térfogatú vírus-tartalmú anyag. Ez lesz a vírus titer. Ehhez:
1) a mintából vírus-tartalmú anyag előállítása egy sor egymást követő 10-szeres hígításokat. A számos hígítást többet kell tennie (azaz, hogy az utóbbi már nem a legmagasabb adta a fertőző hatás egyáltalán). 10 egymást követő hígításokat mindegyikébe 10 steril kémcsőbe öntjük 9 ml steril fiziológiás sóoldatban, majd simán bevezetjük az első 1 ml szuszpenziót. Keverjük a tartalmát az első cső, 1 ml erősítés, és a második cső, a tartalmát keverjük, és 1 ml-re a második cső - a harmadik, és így tovább ,.
2) az azonos mennyiségű mindegyik hígításból a vírus-tartalmú anyag fertőzik a fogékony, hogy ez a vírus az élő teszt tárgyakat. Az egyes csoport esetén legalább 4-6 vizsgálati tárgyak (statisztikai megbízhatóság);
3) idő után veszi figyelembe az eredménye az intézkedés a vírus fertőzött objektumok (halál, betegség, kóros elváltozásokat, vagy sejtkárosító hatás). A halál a laboratóriumi állatok, EC első 48 órában tekinthető specifikus. Elszámolás megszűnik után 2-3 nappal megszűnése után az esetben;
4) határozzák meg, amelyben a vírus hígítás hatékonynak bizonyult 50% -a érzékeny tárgyakat. Hatása a vírus határozza LD50 ELD50, ID50 és TSPD50 EID50. Úgy gondoljuk, hogy ez az adag megfelel hígítás 1 ED50. A dózis a vírus megszámoltuk különböző módszerekkel (Reed és Menchu, Kerber).
Titráláshoz a vírus-tartalmú anyagot vizsgált állítottuk elő egy sorozat egymást követő tízszeres hígításával 1:10, azaz 10 -1 1: .. 10.000.000, azaz 10 -7. vagy több (10 1. 10 -2. 10 -3. 10 -4. 10, -5, stb). Az összeg a hígítás függ a várható vírustiterszint, meg kell főzni ahhoz, hogy az utolsó (legmagasabb) hígítás nem nyújtana többé fertőző hatása. A fertőző vírus hatása (nagysága fertőző hatás) minden egyes hígításból arányosan csökken a logaritmusát a hígítási (vagy dózis). Azaz, 1: 100 hígításban (10 -2) fertőző hatása a felére csökkent, ha 1: 1000 (10 -3) háromszor, stb ...
Minden hígított vizsgálati vírust tartalmazó anyagot egy adott azonos térfogatú egyenlő csoportba fertőzik a fogékony, hogy ez a vírus élő vizsgálati tárgy (a laboratóriumi állatok, csirke embrió, szövettenyészetek). Így úgy tropizmus és vírusos dózist, hagyományos, az ilyen beadási mód az anyag. Minden csoportnak legyen legalább 4-6 vizsgálati tárgyakat, t. K. A kevesebb statisztikai feldolgozását az anyag túl sok hibát.
Meghatározása azonban a vírus titer nagyon nehéz megtalálni olyan hígításban, hogy egyikük lenne pontosan halálát okozta 50% fertőzött állatokat. Gyakran a titrálás folyamán számos élő és elpusztult állatok egyenlőtlen. Ebben az esetben, hogy pontosabban meghatározzuk a titert széles körben használják a virológia által javasolt módszert Reed és Muench. Ők ajánlottak titrálás, hogy a tapasztalatok nagyszámú csoportok 4-6 érzékeny modellek minden csoportban. Az eltérés a valódi értékét LD50 használata miatt a kis mennyiségű vizsgálati állat a csoport korrigáljuk, hogy amikor elhullási százalékot számoltunk működnek az adatokat az kumulált mortalitás (kumuláció - felhalmozódás).
Reed és Muench alapuló módszer logikus feltevést, hogy az állatok (és a többi modell), aki meghalt a fertőzés után a vírus hígítási például 10 -5. és meghal a fertőzés során alacsonyabb hígításban (10 -4. 10 -3) vírus. Ha az állat nem esik ezen a hígítás, továbbra is él, és közben megfertőzheti nagyobb hígításban (10 -6. 10 -7). Ennek alapján, a kapott eredmények vannak kitéve interpolációs és kifejezni őket formájában halmozott adatokat, amelyek alapján kiszámított% -os mortalitást.
Kiszámításánál a kumulatív adatok egerek esett egy magasabb hígítási, hozzáadjuk a halálozások száma az alsó hígítás. Egerek maradt életben egy alacsonyabb hígítás, adunk az állatok számát, amelyek nem ölte meg a magasabb hígítási (az irány azt a nyíl mutatja). Miután megkapta a adatok meghatározásához kumulatív% -os mortalitás. A százalékos mortalitást az egyes hígítások a következőképpen számítjuk ki:
% Mortalitás = száma elpusztult (kumulatív adatok) / Max fertőzött (kumulatív adatok) x 100
A hígítást, ahol a% mortalitást 50% -ot megközelítő, említett a legmagasabb és a legalacsonyabb a kritikus adagot.
LD50 határozza meg a képlet:
,
ahol LD50 - a kívánt hígítási a vírus; B - hígítás halált okozó több mint 50% -a az állatoknak; b - a százalékos mortalitás szerinti tenyésztési B; és - a százalékos mortalitás szerinti hígítási amely halálát legalább 50% -a az állatoknak; d - hígítási tényező.
A titer a vírus, által kifejezett egy számot egy frakcionális kitevő, általában olyan formában, és a bal. Meg lehet könnyen átalakíthatjuk egy abszolút érték, és segítségével antilogarithms táblázat (4 számjegyű matematikai Bradis táblázatok). Amint táblázat antilogarithms megtalálják az abszolút értéke a megfelelő hígítás 1 LD50.