Callusogenesis alapjául sejtkultúrákon - studopediya
Gyakorlatilag fontos in vitro fejlesztett technológiák alkalmazásával tárgyak különböző szervezetének összetettségével, kezdve az izolált protoplasztokat és befejezve izolált szervek vagy embriók. Azonban tenyésztett sejtek központi szerepet játszanak. A fő típusú tenyésztett növényi sejt egy bőrkeményedés.
Kallusz szövetet. vagy kallusz szövetet nevezzük, alakult át a rendezetlen proliferációját növényi sejtek. Viszont ez a tumorsejtek proliferációját és szövetben az tenyésztés.
A kalluszt fragmentumok a különböző szervek a növények, az úgynevezett explantátumokat helyezzük mesterséges tápközegbe kémcsövekben, palackokban vagy Petri-csésze. A folyamat, mely során tenyésztjük, és a kallusz igényel abszolút aszepszisre. Az explantátumokat kezeltünk különböző sterilizálószert tartalmazó oldatok a legtöbb aktív klórt vagy higany (hipokloritok, higany-klorid, disav), amelyhez hozzáadjuk a jobb nedvesítés detergensek. Táptalaj és a csészéket előtt sterilizálni kell használni túlhevített gőzzel autoklávban. Vegyületek lebontható magas hőmérsékleten, és szűréssel sterilizáljuk keresztül speciális szűrőket, pórusméret nem haladja meg a 0,2 um.
A kompozíció a tápközegek formájában sók alapelemek fenntartásához szükséges az élet növények: kálium, kalcium, a nitrogén, magnézium, foszfor, kén-és nyomelemek: vas, cink, bór, réz, mangán, kobalt és mások. A tenyésztett sejtek nem képesek a fotoszintézis, ezért, a táptalaj, mint energiaforrás a cukrot, általában szacharóz, vagy glükóz. Kalluszsejtekkel is kell vitaminokat. Annak szükségességét, hogy egy szerves nitrogénbázis találkozott az adagolás a kazein hidrolizátum közepes vagy egyes aminosavak. Egy nagyon fontos eleme a tápközegnek természetes fitohormonok (IAA, IBA, zeatin) vagy szintetikus növekedést szabályozó hormonális aktivitással: auxin - naftil-ecetsav (NAA), 2,4-diklór-fenoxi-ecetsav (2,4-D) vagy citokinint, - benzil-amino (BAP ), kinetin és mtsai. kifejlesztettek néhány kiviteli alakját szokásos táptalaj.
A szövet képződik a tápközegben az explantátum nevezett sejtek primer kallusz. Ahhoz, hogy megőrizze a növekedés, mint az akkumulátor kimerülése része kalluszból periodikusan átvisszük friss táptalajt. Az idő közötti transzferek (Szubkulturázás) függően változik a növekedési ütem a szövetek 3 és 6 hét. Bőrkeményedés tartjuk in vitro kultúrában, az úgynevezett passiruemym.
A termesztés a kalluszból és a szilárd táptalajon hívják felületes. Emellett a felület lehet kapott tenyészetet szuszpenziós tenyészetben növesztett sejtek folyékony tápközegben. Összetétele a folyékony közeg általában ugyanaz, mint a szilárd, de agar nélkül. A szuszpenziós tenyészet morzsalékos kalluszok alkalmasabbak, egy folyékony közegben széteső az egyes sejtek és sejtcsoportok 5-50 - aggregátumok. Szuszpenziós tenyészeteket lombikokban keverés, rázás kötelező, hogy a normál oxigénellátás sejtekben. Időszakonként, zagy egy részét átvisszük egy friss táptalajra, hogy a folyamatos növekedést. A sejteket folyékony közegben általában szaporodnak gyorsabb, mint a szilárd, így az idő közötti transzferek csökken 2-3 hét.
State of tenyésztett szöveti értékeljük aránya az élő sejtek, növekedési ráta és aktivitását a sejtosztódást. A sejtek életképességét úgy határoztuk meg a mikroszkóp alatt és a különleges festékek, így például, az Evans-kék vagy metilénkék, fenosafranina, eozin és mások. A festék nem hatol be élő sejtekbe, tartósított integritását a plazmamembrán, így csak megfestettük a halott sejteket.
A tenyészetek növesztése értékeljük növekedése nyers vagy száraz tömeg szövet termesztési ciklus idejére, vagy növelni a sejtek számát 1 ml. Az utóbbi szám gyakran használják szuszpenziós tenyészetek. Szöveti növekedés áll osztódó sejteket és nyújtás. Jellemzésére aktivitásának hasadási használatban indikátor nevezett mitotikus indexet. Ez az arány a sejtek egy adott idő alatt a mitózis fázisban. Határozzuk meg a mitotikus indexet a mikroszkóp alatt a összenyomódott készítmények vagy szöveti metszeteket festettük atsetoorseinom acetocarmine vagy százalékában az összes osztódó sejteket.
A növekedés a szövettenyészetben in vitro leírt S-alakú görbe. A teljes növekedési ciklus lehet osztani több szakaszban történik: látens (lag fázis), ahol a látható növekedés nem figyelhető meg; exponenciális, ahol a növekedés felgyorsul; lineáris, ahol a növekedés sebessége állandó; lassulása növekedés fázisában, stacioner fázis, melynek során szövet tömegének és a sejtek száma nem változik, és a fázis lebomlási kíséretében sejthalál. Attól függően, hogy a használt növényfajok explantátum, összetétele a tenyészközegben vagy a növekedési körülmények az arány a időtartama az egyes fázisok a növekedési ciklus változhat.
Plant in vitro tenyésztett sejteket, egyedülálló képessége, hogy megosszák nemcsak alkotnak szervezetlen tömege növekszik, hanem menj a másodlagos differenciálódás, aminek elemeit az érrendszer, szervei vagy csírák zarodyshepodobnym struktúrák, hogy a későbbiekben kialakulhat egy egész növény. Az ingatlan Az izolált sejtek, hogy elérjék a teljes fejlődési potenciálját a kialakulását egy új szervezet úgynevezett működőképes. A kombináció a folyamatok a sejt differenciálódás alkotnak egy adott szerv és szövet morfogenezis fogalom egyesítünk egy in vitro tenyészetben.
A fő tényező okozza az átmenet szervezetlen tenyésztési sejtmorfogenezis egy változás a beállított, vagy a számát hormonális tényezők a táptalajban. Együtt hormonoknak a indukciója morfogenezis befolyásolja cukor, bizonyos aminosavak és más trofikus anyagok. Csak az számít, intenzitása és minősége a világítás, a hőmérséklet, levegőztetés, és egyéb fizikai tényezők.
Vannak többféle morphogenesis: hisztogenezisében, organogenesis és szomatikus embriogenezis. Hisztogenezisében. vagy szövettani differenciálódását a kallusz sejtek kialakulását kallusz a különböző szövetekben: az elemek az érrendszer, mlechnikov, rostok, szőrök. Organogenesis - különbségtétel kalluszsejtekkel egész szerveket. Attól függően, hogy milyen típusú alaktesteknek megkülönböztetni gynogenesis - képződését szár nyerget, gyökér kialakulása - könyvjelző kezdetei a gyökerek, és a virágos morphogenesis - képződését Tsvetkova merisztéma. Szomatikus embriogenezis - a formáció a kallusz szuszpenziós tenyészetben vagy embrióid - zarodyshepodobnyh szerkezetek, amelyek képesek a fejlődő egy felnőtt növény.