Rekombináns DNS-plazmidok - ez az, ami van, értékének meghatározása a jelentés, elvont, absztrakt,
History átvételét
Előállítása rekombináns DNS in vitro és a gének klónozása elsőként valósította meg 1972-ben amerikai tudósok Boyer és Cohen.
Kromoszomális DNS E. coli baktérium, és a plazmidot úgy vannak kitéve csövek speciális enzim EcoRI restrikciós enzimet (Eco-er-on) képező a „ragadós” véget ér. Annak a ténynek köszönhetően, hogy a cirkuláris plazmidot tartalmaz csak egy specifikus nukleotidszekvencia, amely felismeri és elvágja az enzim EcoRI restrikciós enzimmel, az enzim csökkenti a kettős szálú plazmid DNS-t csak egy helyen, és hordoz egy gyűrű alakú plazmid nyitott állapotban a „ragadós” véget ér. Egy DNS-molekula a kromoszóma van osztva, mint sok szegmenst, mivel ez tartalmazza a specifikus nukleotid-szekvenciák, amely felismerhető, az enzim által EcoRI restrikciós enzimet. DNS-szegmensek erős elektromos mező, az elektroforetikus telepítési legnagyobb elválasztott és izolált szegmenseket festett egy speciális festékkel. Ezáltal látható szabad szemmel állítja egy értéket DNS szegmensek. A DNS-szegmens lehet elválasztani a elektroforetikus gél bármely nagyságú, feloldva azt vízben. Ezen a módon, Cohen és Boyer összekeverjük az in vitro izolált DNS-szakasz egy kromoszóma „ragadós” végeket a plazmid DNS-t, amely a nyitott állapotban, és ezek a különböző szegmenseket ligáljuk DNS-ligáz segítségével enzim kovalens kötést képez. Ennek eredményeként a plazmidok bejuttatott DNS-szegmens egy kromoszómán. Így, az első alkalommal létrehozott egy rekombináns plazmid (ábra. 10).
gén klónozása
A molekuláris szerkezete Ez a plazmid hordozza DNS-vektor (útmutató) függvény, mint a plazmidok rekombinálódnak a kromoszomális DNS-t. Ez a vektor konstrukció, mert a bennük antibiotikum rezisztencia gén-ben vezették be besplazmidnuyu, t. E. az instabil antibiotikumot bakteriális sejt. Baktériumok rekombináns plazmidokat annak a ténynek köszönhető, hogy van egy antibiotikum rezisztencia gént, eltérően besplazmidnyh baktériumok nem pusztulnak a közegben. antibiotikumot tartalmazó. Ezért, a vizsgálati csövet helyezünk, és megjelent antibiotikum klón rekombináns baktériummal, amelyet ezután növesztjük. Mindegyik baktériumból aktív komponenst klón tartalmazza a szegmens egy idegen (heterológ) DNS, és ez a szegmens is szaporodni a szaporodás, a bakteriális biomassza. Továbbá, ha a rekombináns plazmid képes autonóm replikációra, az idegen DNS-szegmens tud szaporodni több mint tízszeres. Szaporodás idegen DNS-sel klónozó vektor konstrukció nevezett gének. Például egy virális vektor, és a fág DNS-molekulák is klónozásához használt DNS-szegmensek vagy gének vándorlás.