Módszerei termelő baktériumok energia (légzés, fermentációs)
A légzés vagy a biológiai oxidáció, alapuló redox reakciók, kiterjesztve alkotnak ATP univerzális akkumulátor kémiai energia. Energiára van szükség a mikrobiális sejt aktivitása. Amikor a légzés fordulhat elő oxidációs és redukciós folyamatok: oxidáció - visszaadja donorok (atomok vagy molekulák) vagy elektronok hidrogén; Recovery - hozzáadása hidrogénatom vagy elektron akceptor. Elektron akceptor vagy hidrogén molekuláris oxigén (úgynevezett aerob légzés) vagy nitrát, szulfát, fumarát (úgynevezett anaerob légzés - nitrát, szulfát, fumarát).
Anaerobiózist (a görög der -. Air + bios - élet) - az életfunkciók áramlik hiányában szabad oxigén. Ha hidrogén donorok és akceptorok szerves vegyületek, mint a folyamatot nevezzük fermentáció. Az erjesztés során fordul elő enzimatikus hasításával szerves vegyületek, főként szénhidrátok, anaerob körülmények között. Mivel a végső hasítási termék ...
szénhidrátok megkülönböztetni alkohol, tejsav, ecetsav és más fermentációs.
Tekintettel a molekuláris oxigén, a baktériumokat lehet osztani három fő csoportra: az obligát, azaz kötelező, aerob, anaerob obligát és fakultatív anaerob.
termesztési technikák anaerob.
Termesztésére anaerob baktériumok szükséges, hogy csökkentse a redox potenciál a környezet, a feltételek megteremtése anaerobiózis, t. E. alacsony oxigéntartalma a közeg és a környezet. Ezt úgy érjük el, a fizikai, kémiai és biológiai módszerekkel.
Fizikai módszerek. Ennek alapján, a mikroorganizmusok tenyésztéséhez egy levegőtlen környezetben, azt érjük el:
1) a vetés tartalmazó tápközegben szűkítő és könnyen oxidálható anyagok;
2) mélysége vetés mikroorganizmusok a szilárd táptalajon;
3) mechanikusan eltávolítjuk a levegőt a hajók, amelyek anaerob mikroorganizmusok termesztik;
4) helyett levegőt a hajók bármely közömbös gáz.
Mivel könnyen oxidálódó anyagot alkalmazunk a glükóz, laktóz, és a nátrium-formiát.
Legjobb folyékony tápközegben redukáló anyagok egy olyan környezet, Kitta - Tarotstsi amely előnyösen használható a felhalmozódása anaerobok a kezdeti beoltását a vizsgálati anyag, valamint, hogy támogassa a növekedést a anaerobok izolált tiszta tenyészet.
A vetési mélységet mikroorganizmusok sűrű közeg szerinti eljárással előállított Vignal - Veyona amely abban áll, mechanikailag védi növények anaerobok ellen levegő oxigénjével. Vegyünk egy üvegcső 30 cm hosszú és 3-6 mm-es átmérőjű. Az egyik vége a cső belekeveredik a kapilláris egy Pasteur-pipettával, és a másik végén do szűkület. A fennmaradó széles végét a cső be van dugva a dugót. A kémcsöveket a megolvasztjuk és lehűtjük 50 ° C-on Nutrient beoltott agarlemezekre a vizsgálati anyag. Ezután nasasyvayut beoltott agar-agar steril csövekbe Vignal - Veyona. Kapilláris csővég tömített az égőbe lángcső és inkubátorba helyezzük. Ez kedvező feltételeket teremt a növekedés a legszigorúbb anaerob. Ahhoz, hogy izoláljuk azokat a telepeket cső metszeni fájlt, aszeptikus körülmények között, kolóniákká szinten, törés, és a kolónia Capture steril hurkot, és átvisszük egy kémcsőbe táptalajban további növekedés és a tanulmányi tiszta formában.
Levegő eltávolítása által termelt mechanikai szivattyú speciális eszközök - anaerosta-nek, amely kerülnek csésze vetés anaerob. Mozgatható Anaerob egy vastag falú fém henger egy jól bedugaszolt sapka (gumi béléssel) felszerelt vákuum és egy terelő csapot. Elhelyezése után a beoltott lemezeket vagy csövek a levegő anaerob eltávolítjuk vákuumszivattyúval.
Cseréje levegő közömbös gáz (nitrogén, hidrogén, argon, szén-dioxid) végezhetjük ugyanazon Anaerob elmozdításával ez egy gázpalackból.
A kémiai módszerek. Alapján a felszívódását a légköri oxigén egy lezárt edényben (anaero cikkek, deszikkátorban) anyagok, mint például a pirogallol vagy Na2S204 nátrium-hidroszulfit.
Biológiai módszerek. Ennek alapján a közös termesztését szigorúan anaerob, aerob. Ehhez agar lemez fagyasztott átmérőjű csésze kivágtuk steril szikével agar csík szélessége körülbelül 1 cm-es. Két forog az egyik Féltárcsos agar lemezre. Az egyik oldalon az agar lemezen beoltjuk aerob, gyakran használják például S. aureus vagy a Serratia marcescens. A másik oldalon a beoltott anaerob. Az élek a lemezeket lezárjuk Gyurmazáras vagy öntse megolvasztott paraffinnal, és inkubátorba helyezzük. Jelenlétében megfelelő körülmények a pohár megsokszorozódik aerobok. Miután az összes oxigént a térben a csésze fogják felhasználni, hogy a növekedés a anaerob baktériumok (3-4 nap). Annak érdekében, hogy csökkentsék a levegő hely a csészét öntjük a tenyésztő táptalajban vastagabb.
Kombinált eljárások. Kombinációján alapuló fizikai, kémiai és biológiai módszerekkel létrehozására anaerob. 3. A monoklonális antitest. Alapelvei előkészítés és alkalmazás.
A monoklonális antitestek. Minden egyes B-limfocita és annak utódai, eredményeként jött létre a proliferációt (azaz a, klón), szintetizálni képes antitest paratóp jól definiált specifitással. Az ilyen ellenanyagok nevezzük monoklonális. Természetes körülmények között, a mikroorganizmus megszerezni monoklonális antitestek szinte lehetetlen. Az a tény, hogy az ugyanazon antigén determináns egyidejű reagálni 100 különböző klónok B-limfociták, az antigén specificitás kissé eltérő receptorokhoz és természetesen affinitással. Ezért, ennek eredményeként az immunizálás még monodeterminantnym antigén mi mindig többszólamú antitestek.
Lényegében monoklonális antitestek megvalósítható, ha magatartása előválogatás antitest-termelő sejtek és a klónozás (azaz, a kiválasztás az egyes klónok tiszta tenyészetek). Azonban a feladat bonyolítja az a tény, hogy a B-limfociták, valamint más eukarióta sejtek korlátozott a várható élettartam és a számos lehetséges mitotikus osztódás.
Antitesteket termelő hibridómákat monoklonalye, vagy szaporítjuk adaptált berendezés termesztésére sejttenyészetekben vagy bevezetésével, intraperitoneálisan külön sorban (ascites) egerekben. Az utóbbi esetben, a monoklonális antitesteket felhalmozódott aszcitesz folyadékban, amelyben szaporodnak gubridomy. Állítjuk elő, mint más módon, és a monoklonális antitestek tisztított, és használt szabványosítására azok létrehozását alapú diagnosztikai készítmények.
Hybridoma monoklonális antitestek alkalmazása széles körben elterjedt a fejlesztés diagnosztikai és terápiás immunbiológiai készítmények.
A patogenitását és virulenciáját baktériumok. patogenitási faktorok.
Patogenitás - specifikus tulajdonság öröklődik, mint meghatározott az a mikroorganizmus genomjába, az evolúció során a parazita, azaz genotípusos tulajdonság tükrözi a potenciális mikroorganizmus behatolnak macroorganism (fertőzőképesség) és szaporodnak azokban (invazív), hogy hatására a komplex patológiai folyamatok .. eredő betegség.
Fenotípusos jellemző a kórokozó virulenciájának, azaz nyúlás tulajdonságuk, hogy nyilvánul bizonyos körülmények között (variabilitása mikroorganizmusok mikroorganizmus érzékenységét változások, stb). Virulencia növelhető, süllyesztése, intézkedés, azaz ez az intézkedés a patogén. Mennyiségi virulencia mutatókat ki lehet fejezni DLM (minimális halálos adag), a DL «(okozó dózis 50% -ának elhullását a kísérleti állatok). Ugyanakkor figyelembe kell venni az állat fajtája, neme, súlya, a módszer a fertőzés, a határidő a halál.
A tényezők a patogenitás közé a mikroorganizmusok azon képességét, hogy azok a sejtekhez kötődjenek (adhéziós), helyezzük a felületükön (kolonizáció), adja meg a sejteket (invázió) és ellenállnak organizmus védelmi tényezők (agresszió).
Tapadás a kiváltó fertőző folyamatok. Az adhézió azt jelenti, hogy az a mikroorganizmus adszorbeált érzékeny sejtek révén, majd kolonizáció. Structure felelős kötést a sejt egy mikroorganizmus úgynevezett adhezinek és található a felületén. Adhezinek nagyon változatos szerkezetű, és egy nagy specifitású - a képességét, bizonyos mikroorganizmusok tulajdonítanak a hámsejtek a légúti, egyéb - bél traktusban vagy az urogenitális rendszer, stb Az adhéziós folyamat befolyásolhatja a fizikai és kémiai mechanizmusok kapcsolódó hidrofób mikrobiális sejtek, az összeg a vonzó és taszító energia. A Gram-negatív baktériumok adhézióját miatt előfordul, hogy I pilus és általános típusú. Gram-pozitív bakteriális adhezinek fehérjék és teichonsav savak a sejtfal. Más mikroorganizmusok ezt a funkciót a különböző sejt szerkezete a rendszer: felületi proteinek, lipopoliszacharidok, és mások.
Invasion. Az invazív azon képességét jelenti, mikrobák behatolni a nyálkahártyák, a bőr, a kötőszövet akadályok a belső környezet a test, és terjedt el a szöveteket és szerveket. Behatolás a sejt egy mikroorganizmus társított az enzimeknek a termelését, valamint a tényezők gátolják a sejt védelmet. Mivel az enzim hialuronidáz elhasítja hialuronsav, amely része a sejtközötti, és így növeli a permeabilitást a nyálkahártyák és a kötőszövetek. Neuraminidáz hasítja neuraminsav, hogy része a felszíni receptorok a nyálkahártyák sejtek, amely elősegíti a penetráció a kórokozó a szövetben.
Agresszió. Under agresszivitás érteni, hogy az a kórokozó mikroorganizmus ellenállni védő tényezők. Az agresszió tényezők közé tartoznak a proteázok, - enzimek, amelyek elpusztítják a immunglobulinok; koaguláz - enzimet, alvadási vérplazmában; fibrinolizin - feloldjuk fibrinháló; Lecitináz - enzim ható foszfolipid membránok a izomrostok, eritrociták és egyéb sejtek. Patogenitási összefüggésben lehet más mikroorganizmusok és enzimek, míg ezek mind a helyi és általános.
Fontos szerepe van a fertőző folyamat toxinok játszani. A biológiai tulajdonságai bakteriális toxinok vannak osztva exotoxinok és endotoxinok.
Exotoxinok termelnek mind a Gram-pozitív és Gram-negatív baktériumok. Szerint a kémiai szerkezete, fehérjék. Exotoxin hatásmechanizmusú a sejt több típusa van: citotoxinok, membranotoksiny funkcionális blokkolók, exfoliants és eritrogeminy. A hatásmechanizmus a protein toxinok csökkenti kárt a létfontosságú folyamatok a sejt: megnövekedett membrán permeabilitását, fehérjeszintézis blokád és egyéb biokémiai folyamatok a sejtben vagy a kezelni a koordinációt és sejtjeinek kölcsönhatása. Exotoxinokat hatásos antigének és amelyek a test antitoxinok. Exotoxinokat erősen mérgező. Hatása alatt a formalin és exotoxinok hőmérsékleten elvesztik toxicitás, de megtartja immunogén tulajdonságait. Ezek a toxinok hívták toxoidok és tetanusz használni, hogy megakadályozzák a betegség, az üszkösödés, botulizmus, diftéria, és arra használják, mint antigének állatok immunizálására szerezni anatoksicheskihsyvorotok. Az endotoxinok kémiai szerkezetükben LPS tartalmazott a sejtfal a Gram-negatív baktériumok, és kerülnek a környezetbe, ha a baktérium lízis. Endotoxinok nincs specifitással, termikusan stabil, kevésbé toxikus, gyenge immunogenitással. Amikor a test a nagy dózisú endotoxinok gátolják fagocitózis, granulocitózis, monocitózis, növeli a kapilláris permeabilitás, romboló hatással vannak a sejtekre. Mikrobiális elpusztítani lipopoliszacharidok vér leukociták, ami hízósejt-degranuláció a kiadás értágítók, aktivált Hageman-faktor, ami leukopenia, hipertermia, hipotenzió, acidózis, dessiminirovannoy intravaszkuláris koaguláció (dCK).
Endotoxinok stimulálják a szintézisét interferon, komplement rendszer aktiválja a klasszikus útvonalon allergiás tulajdonságokkal.
Beadva kis dózisú endotoxin növeli a szervezet ellenállóképességét növeli a fagocitózist, stimulált B-limfociták. A szérum egy állat immunizált endotoxin gyenge az antitoxikus aktivitását és neytralizuetendotoksin. A kórokozó baktériumok által ellenőrzött háromféle gének gének - saját kromoszómák, gének, plazmidok által bevezetett mérsékelt fágok.