Készítésére használt berendezések szövettani készítmények fénymikroszkópos
6. példa szeletek;
8. Végül szakaszok.
Rövid leírása A szakaszból áll:
1. Capture anyag.
A szövettani vizsgálat vegye darab a szervek és szövetek nem több, mint 1 cm. Az anyagot az szükséges, hogy a lehető leghamarabb halála után az emberek (a módszer tanulmány az emberi holttest anyag - boncolás).
Diagnosztikai célokra az anyagot szövettani vizsgálatra lehet mászni emberben in vivo speciális szerszámok vagy a műtét alatt. Ez a módszer anyag előállításának nevezzük biopszia.
Vett szövettani vizsgálatra anyagot azonnal kell alávetni rögzítéshez. Rögzítés - A szövetet feldolgozási módszer megszilárdítása érdekében a szerkezetét élettartama. Ezt úgy érjük el, vetjük alá a szövet speciális megoldásokat (fixáló). A legjelentősebb változás előforduló alatti szövetben a befolyása a rögzítőelem alvadási (koagulációs) fehérjék. Az összeg a befogadó kellene 20-100-szer mennyisége anyagdarab becsukott.
Vannak lapok egyszerű és összetett. Egyszerűen közé 10-20% -os formaldehid oldatot, 96 ° alkoholt 100 (abszolút alkohol), 1-2% ozmiumsav oldat, stb bonyolult kilincsekkel: alkohol - formalinos (alkohol 70º - 100 ml, és 5,2 ml formaiint ... ) Zenker folyadékot (maró hatású szublimátum - 5 g, nátrium-szulfát - 1 g kálium-dvuhromovokioly - 2,5 g desztillált vizet - 100 ml jégecetben, 5 ml) és rögzítő stb Időtartam -... néhány órától 1 napig vagy több jellegétől függően, és tulajdonságait a rögzítőt az anyag.
3.Pomyvka vízben.
Fixálás után, az anyagot mossuk (általában több órán át folyó vízzel), annak érdekében, hogy megszabaduljon a felesleges kicsapódását különböző rögzítő és magában tartani folyadékokat.
Hogy tanulmányozza a mikroszkóp alatt ilyen darabot nem lehet rögzíteni szervek, ezek nem átlátható. Ahhoz, hogy a test darab lehetett mikroskopirovat, meg kell vágjuk nagyon vékony lemezeket - szakaszok, a vastagsága mérik mikrométer. Ezeket a metszeteket készítettünk egy speciális eszközt - Metszőgépek. De ahhoz, hogy csökkentsék egy darab szövet a mikrotomon, akkor elő kell zárni. Ez úgy érhető el impregnálás megszilárdítjuk folyadékok - megolvadt paraffin. Paraffin viasz nem oldódik vízben, és ezért a mosott kelmék fixálás után darabot kell először víztelenítjük, és csak ezután impregnált.
A víztelenítés készült szövet fokozatosan (hogy elkerüljék a ráncosodást történt) által tartva növelésével alkoholok vár: 50 °, 60 °, 70º, 80º, 90º, 96º, 100º. Minden alkoholt szeletek néhány órától 1 napig méretétől függően a darab.
Amikor töltés darab, előzetesen impregnált azok a folyadékok, amelyek oldószerek paraffin (xilolt vagy toluolt). Töltsük ki a paraffin. Amikor szakadó paraffin darabokra abszolút alkohol
átvisszük egy abszolút etanol és kloroform, vagy xilol, hozott egyenlő arányban, majd a tiszta xilolt, és végül, az olvadt viasz telített kloroformos oldat, ahol azok egy inkubátorban hőmérsékleten 37º 1 nap vagy több. További árnyékoló végezzük termosztátban 54º -56º három részletben paraffin.
Végső töltési végezzük azzal a kiegészítéssel, paraffinviasz, amely öntjük speciális dobozok papírból vagy üveglapok, majd ezeket a dobozokat vagy csészék megjelenése után a film felületén paraffin vízbe merítjük.
Van egy teljes keményedés a paraffin. Szeletek a környező paraffin eltávolítjuk a dobozok és segítségével olvadt paraffin paszta faalátétekre kapunk parafintömböket.
Tömítések is el lehet készíteni fagyasztva darabból álló test (sürgős biopszia).
6. példa szelet.
A metszeteket előállított blokkok mikrotommal. A leggyakoribb szánkó mikrotom és fagyasztás. A speciális eszközök mikrotomkés szorított paraffin blokk és mikrotomon kést. Van egy mechanizmus, amely felemeli obektoderzhatel a blokk egy előre meghatározott számú mikrométer. Ez lehetővé teszi az egyes penge csúszó síkjával párhuzamosan a tömb felületén befogadó szakaszok vastagsága 5-10 mikrométer parafintömböket.
Egyedi mikrotomot metszeteket. A festés előtt a paraffin metszeteket óvatosan eltávolítjuk paraffin (xilolban oldunk).
A festést kell végezni annak érdekében, hogy egyértelműen azonosítani mikroszkopikus vékony objektumlistáját. A festetlen szakaszai legtöbb struktúrák egyaránt megtöri a fény, így nem kell figyelembe venni.
Azonosítás a vágott szöveti struktúrák alapján képest egyenlőtlen festék. Néhány cutoff szerkezete reagál savas színezékek, és ezek színes (acidofil, oxyphilous struktúra) reagáltatunk más alapvető színezékek és színes túlnyomórészt (bazofil struktúrák). Egyes struktúrák színesek, és a savas és bázikus színezékek.
Eredet szerint megkülönböztetni a természetes színek, amelyek közé tartoznak a növényi és állati színezékek, és a mesterséges színek. Festék növény hematoxilinnel, amely kivonjuk kékfa, növekvő Amerikában és Örményországban. Állati tinták tárgya kármin amely kivonjuk kármin rovarok élő Cactaceae fák Mexikóban, RA és munkatársai. Jelenleg a legtöbb festékek elő szintetikusan (mesterséges színezékek).
Specifikus festéssel szöveti struktúrák megkülönböztetésére nukleáris festék (festés magok), citoplazma (festés citoplazma), és speciális, szelektív festéssel egy bizonyos struktúrát.
Nukleáris festék - hematoxilinnel, kármin szafranin, metilén-kék, égszínkék, tionin. A citoplazmatikus festékek - eosin, picrofucsin.
Vannak speciális festékek és reagensek: Sudan III (foltok a zsír narancssárga színű), ozmiumsav (impregniruemy ez zsír okrashivatsya fekete) rezortsinfuksin Weigert (ad sötétkék színű rugalmas rostok) orsein (folt elasztikus rostok barna szín). Metilén-kék festés a idegelemeket kék és ezüst impregnáló amikor barnulni.
A legtöbb esetben, a festődést hisztológiai metszetén hematoxilin festőoldatba használt (módszerével állítjuk elő Boehmer) és 1-2% eozin.
8. Következtetés listájában.
Festett vízben és mossuk szeleteket, hogy elkerülje homályosság dehidratálandó alkoholokban (70º, 96º), megvilágít egy karbolfukszin xilol, xilol, majd egy üveg tárgylemezre, ahol a szakasz van elhelyezve egy csepp balzsam és borított fedőlemezt szelet. Balsam egy gyantát feloldjuk xilolban egy faj fenyő, növekvő Kanadában (Kanada balzsam), fenyő gyantát (szibériai balzsam) vagy speciális szintetikus táptalajon.
A tanulmány tisztázása biopszia szövettani diagnózis laboratóriumok igénybe a gyorsított feldolgozó anyag. Darab a szövetek és szervek egyidejűleg keresztül ugyanazt a feldolgozási lépések, de 5-7 napig. Néha gyártott úgynevezett sürgős biopsziát, ha belül 15-80 perc. anyag rögzíti kapott metszeteket és azok megkötésére. Készítsen gyors fixálás 10% formalin, az égő lángja, vagy egy fűtött egy mikrohullámú sütő. Tömítések elérése fagyasztás (klór-etil, szén-dioxid vagy fagyasztó mikrotom segítségével).
Példaként színezőanyagokat diagram hematoxilin - eosin
1. paraffin vagy fagyasztott metszeteket hozott vizet.
2. Hematoxiiin - 3-5 percig.
3. Öblítse le vízzel - 2 perc.
4. differenciálás alkoholban, sósavval megsavanyítjuk (1% -os sósav-oldat 70% -os alkohollal), néhány másodperc, majd redukcióval lúgos vízzel (körülbelül 1 percig). Ez a lépés a kívánatos, de nem kötelező.
5. Öblítés folyó vízben.
6. majd desztillált vízzel öblítettük.
7. Bevonat 1% eozin - 1-2 perc.
8. öblítés desztillált vízzel.
9. Dehidratáció alkoholban - 2 perc.
10. Ébredés xilol - 2 perc
11. Következtetés a világos - egy csepp citromfű, a fedőlemez.