Az elkészítés módja a hisztológiai preparátumokban (Mikrotekhnika) - studopediya
A fő módszerek tanulmányozása biológiai mikro-objektumok fény- és elektronmikroszkópos, amelyeket széles körben alkalmazták kísérleti és klinikai gyakorlatban. A fő tárgya tanulmány a szövettani készült készítmények a szervek a laboratóriumi állatok (patkányok, kutyák, nyulak, stb), legalább a tárgyak vett műtét közben vagy az emberi hullák.
Termelés szövettani készítmények az alábbi fő lépésekből áll:
1. Mintavétel és fixálása biológiai objektumok;
2. Mosás, víztelenítés és feltöltését biológiai objektumok;
3. reakciólépés: szeletek;
4. A festés és megkötéséről szakaszok.
1 - a rögzítés és rögzítése biológiai objektumok. A fő követelmény: a maximális lerövidítése mintavételi anyag, minimális trauma a szövetekhez, és hozzon létre optimális feltételeket fixálás. érzéstelenítés ölésre használják a laboratóriumi állatok, lefejezés, elektromos áram, stb Ezt követi a gyors megnyitása az állat, kitermelésére a szükséges szerveket és szöveteket, amelyekből az éles eszköz kivágjuk kisebb szelet (5-10 mm 3), és tedd a zárban. Elmozdulás reteszt kell haladnia a rögzített tárgy térfogata 20-40 alkalommal. A rögzítés megakadályozza a post-mortem változások a szövetekben, megállás őket a biokémiai folyamatokban. A művelet minden egyes retesz összetettek fizikai és kémiai folyamatok, elsősorban, koagulációs (véralvadási) fehérjék. A szövettani gyakorlatban különböző klipek: egyszerű tartalmazó egy komponenst (formalin, alkohol, aceton) és észterei, amelyek két vagy több komponenst (Carnoy féle folyadék: abszolút alkohol, kloroform, jégecet; folyékony Zenker: bikromát kálium-, nátrium-szulfát, higany-klorid formalin, desztillált víz).
2 - mosás, kiszáradás és feltöltése biológiai objektumok. Vékony szakaszok rögzített biológiai objektumok kell készülniük kell: hogy eléggé sűrű, de nem törékeny. Fixálás után, a darabokat mostuk folyó víz alatt 12-24 órán át, hogy a retesz a többlet. A tárgyak, rögzített alkohol vagy Carnoy féle folyadék, ez a lépés kimarad. Mosás után, a tárgyak kell víztelenített és tömörítve alkoholok növekvő vár, amelyeket egymást követően 50, 60, 70, 90, 96 és 100 az alkohol. Továbbá világít darab, amelyre az első helyezett egy abszolút etanol (mintegy 100) és az O-xilol (1: 1), majd két-három adag tiszta o-xilol. Miután fehérítő anyag kész impregnálás paraffinok. Erre a célra a tárgyak termosztátba helyezzük először a szuszpenzió (a keveréke egyenlő rész o-xilol és paraffin) 37 ° C-on, majd két három adag tiszta viasz hőmérsékleten megolvasztunk 56 ° C Az impregnált paraffin darabokat ragasztott a fa tömb. Az így elkészített biológiai objektumok tárolható hosszú ideig a szabadban.
A kezelés a kemény szövetek (csontok, fogak) azonnal Fixálás és mosás után az anyagot az eljárás mésztelenítés alkalmazásával 5,7% salétromsav oldatot. Mivel a kimosódás a kalcium sókat valamely savval, szilárd szöveti megpuhult, így azok szövettani és megmarad a maradék szerves anyagok. Miután a csontritkulás újra kell öblíteni darabokat folyóvíz alatt, majd víztelenített, megvilágít, és töltse ki a paraffin.
3 - előállítására szövettani metszetek. Sectioning speciális eszközök - mikrotom. Háromféle: szánkó, forgó és fagyasztás. Szánkózás mikrotomot termel lépcsős szakasz, forgatható - soros, fagyasztás lehetővé teszi, hogy kapjunk egy rögzített és nem rögzített szakaszai biológiai anyag nélkül kitöltésével paraffin. Minden mikrotom fel van szerelve egy mikroszkopikus tárgy feeder és egy speciális mikrotomon kést.
A kapott paraffin metszeteket ragasztva egy üveg tárgylemezre, fehérje síkosított keveréket glicerinnel (1: 1) mossuk és levegőn szárítjuk, vagy kemencében 37 ° C hőmérsékleten A metszeteket készítettünk fagyasztó mikrotommal helyezünk egy csésze desztillált vízben, majd rögtön megfestettük.
4 - festés és megkötéséről szakaszok. Festése szeletek használt tisztán látni a mikroszkóp alatt karosszériaszerkezet, és alapjául az egyenlőtlen kémiai összetételét szöveti struktúrák. Mert számos esetben festés festékek. Mindegyikük sorolható származás szerint: növényi (hematoxylin), állatok (kármin), szintetikus (eozin, és mások.); és kémiai tulajdonságok: savas, bázikus, semleges.
Az a képesség, szerkezetek festettük bázikus festékek nevű basophilek. A bazofil sejt szerkezete egy sejtmag, mely a nukleinsavat. A bazofil színezékek közé tartoznak hematoxilinnel, kármin, tionin. Struktúrák megfestettük savas festékek, az úgynevezett oxyphilous, például a sejtek citoplazmájában. Savas színezék-származékok vagy ezek sói (eozin, savas fukszinnal). Semleges színezékek (tripánkék, semleges vörös).
Vannak ezen kívül speciális festékeket. Például, a rugalmas szálakat festettük orseinom vörös-barna színű, rezorcingyanta-fukszin - sötétkék, aldehid fukszin - sötét lila. A zsírok és zsíroldható anyagok a festett sejtek szudán III narancs, ozmium azonos zsír foltok fekete. Ahhoz, hogy azonosítja azokat az elemeket, az idegrendszer módszer az impregnálás ezüst-nitráttal.
Mielőtt bármilyen festéssel paraffin szakaszok eltávolítjuk, a folyamatot nevezzük viaszmentesítésével. Erre a célra, metszeteket egymás végezzük három részletben O-xilol, alkoholok erőd lefelé irányuló (a körülbelül 100 és körülbelül 70) helyezünk el ezután desztillált vízben. Fagyasztott szakaszok nem igényelnek viaszmentesítésével.
Az ily módon előállított szeleteket lehet festeni szinte minden festék. A leggyakrabban használt H & E festés. Mi metszeteket helyezünk hematoxilin oldattal 3-5 percig, majd csapvízzel - az öblítéshez és a differenciálás. Elsajátítása után sejtmagok lila sejtek (ellenőrizni mikroszkóp) termelnek eozin-festés oldat 0,5-1,5 percig, desztillált vízben mostuk, és a dehidratált alkoholokban növekvő erőt (körülbelül 70 és körülbelül 100). Továbbá, az alkohol eltávolítására és fehérítésére szakaszok elhelyezett egymás után három részletben o-xilol és a beágyazott Kanadában balzsam.
Egyes esetekben, előkészítése a feldolgozási körülmények között nem érintkezhet alkoholokkal, o-xilol (például festés zsír), ami szükségessé teszi, hogy kössön közeget vízzel elegyedő: glicerin, glicerin-zselatin és mások.