HPV-fertőzés
Egy nagy csoport papillomavírus vált hatékonyan vizsgálták az utóbbi időben. Stimulus intenzív tanulmányozása e vírusok az a tény, hogy néhány közülük kapcsolatos előfordulása rosszindulatú daganatainak anogenitalis régióban. Közül a tumorok a genitális lokalizációs különleges helyet foglal el a méhnyakrák, a virális etiológia bizonyítja számos epidemiológiai tanulmányok és megerősítette jelenlétét a daganat szövet DNS bizonyos típusú humán papillomavírus (HPV).
HPV - kis DNS-t tartalmazó vírusok, a jellemzője, amely az a képesség, hogy indukálja proliferációját a hám a bőr és / vagy nyálkahártya. HPV nem szaporodnak sejttenyészetben, így tájékoztatás a biológiai vírusok alkalmazásával kapott molekuláris genetikai technikák és epidemiológiai vizsgálatok. A létezése 100 típusú, amelyek különböznek a DNS szerkezetét, 75 közülük molekulárisán klónozták és teljesen szekvenáltuk. HPV tipizálás nem alapul antigén különbségek, és a DNS-homológia.
Közül 30 fajta HPV megfertőző anogenitális régió megkülönböztetni a fajta magas és alacsony kockázati faktorú. HPV található 93% -ában az invazív rák anogenitaly, 50% -uk - HPV16.
Telepített szexuális úton továbbítását HPV. Miatt gyakori a tünetmentes HPV marad a szervezetben a fertőzött emberek gyakran nincsenek tisztában, hogy fertőzött. Nemrégiben jelent meg a genitális szemölcsök több fertőző, mint a hosszú múltra.
Sharp csökkenése immunitást figyeltek meg az AIDS, a kezelés citotoxikus gyógyszerek majd reaktiválása látens fertőzés pappllomavirusnoy, hogy a klinikailag nyilvánul több szemcseképző papillomatoznyh csírázás.
Milyen a replikáció a vírus, vírus részecske szerelés és felszabadulását a sejtben, nem tekinthető teljes mértékben határozták meg. 2 módja van replikációs - állandó episzomális replikációt a genom bazalyyum epitélium réteg és autonóm replikációt differenciáltabb sejteknek a szemcsés réteg. Episzomális replikációt a genom folyamatosan zajlik, de ez a szám a DNS másolatok alacsony. Vegetatív replikáció a sejtmagban, ahol a megtermelt utódok HPV. Vírusrészecskék kiszabadulását eredményezi a degeneráció lehámlott sejtek.
Mivel a tanulmány a HPV hibridizációs módszer bővíti a magas kockázatú onkogén vírusok. Ez a HPV 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68. A vírusok alacsony kockázatú onkogén HPV típusok 56, 11, 42, 43, 44. HPV 16 leginkább gyakran megtalálható a szövetben a pikkelyes méhnyakrák, a HPV-18 - a mirigyes szövetben a rák - adenocarcinoma.
Táblázat. 6.7 ábra a HPV-típusok kimutathatók különböző bőrt és a nyálkahártyákat.
HPV-típusok megtalálhatók különféle bőrelváltozások és a nyálkahártyát
(Villiers EM 1989)
2, 6, 11, 16, 18, 30
Alkalmazási módszerek meghatározására HPV DNS hatékonyságát növeli a detektálási rákmegelőző elváltozások, egyrészt, mert a rendkívül nagy érzékenység a módszerek, prediktív értéküket összehasonlíthatatlanul nagyobb, mint citológiai vizsgálattal; Másodszor, a szabványosítás molekuláris technikák biologicheskph elérhető, míg a citológia nehezen lehet csökkenteni ugyanazt a színvonalat.
Neamplifikatsionnye módszerek rutin diagnosztikai gyakorlatban jelenleg nem használják, azokat kutatási célokra használják.
A tabl.6.8 alapvető molekuláris biológiai technikákat használják, hogy meghatározzák a HPV DNS-t.
Módszerek kimutatására a HPV DNS
Dot-blot, Southern-blot hibridizáció, in situ hibridizáció
Polimeráz láncreakció - PCR
Ligaznlya láncreakció - LCR
hibrid csapda rendszer - "Digene Hybrid Capture Rendszer II"
Amplification módszereket, amelyek célja, hogy meghatározza azokat a különleges HPV-típus oligonukleotid az anyagban, és számuk szaporodását PCR vagy LCR, amplifikáció nevezzük a cél. A világ használja a számos standard reagensek minden típusú HPV, hazánkban gyakorlatilag használható alapozók laboratóriumi előkészítése.
Anélkül, hogy részletesen a cél-erősítő módszereit lásd jelerősítő módszerek, amelyek nem igényelnek korlátozásokat a laboratóriumban, a specifikus PCR laboratóriumokban.
kettős gén csapda rendszer - „Hybrid Capture II” Abbott cég (USA), nélkül használunk e korlátozásokat, amelyek akkor szükségesek, ha PCR-rel. Ez biztosítja:- számítógép az eredmények értelmezése, amely megszünteti a szubjektivitás az értékelés;
- ismételhetőség és az eredmények megbízhatóságát;
- teljes kutatási ciklus egy nap.
„Digene Hybrid Capture II” rendszer RNS-DNS hibridizáció oldatban, majd a „farok” közötti reakció immunologncheskoy hibridóma RNS-minta - DNS-célszekvenciát és specifikus antitestek ez a hibrid. Test köszönheti nagy specifitással több független komponenseket.
Először is, a cél a teljes genomját HPV. Hosszú egyszálú RNS hibridizál hatékonyan valamennyi 8000 HPV DNS nukleotid. RNS-DNS hibrid sokkal stabilabb, így elkerülve a nemkívánatos mellékreakciókat.
Másodszor, a forrás a további reakció érzékenység ellenanyagokat használni a RNS-DNS hibrid, egy több konjugált molekulák az alkalikus foszfatáz. Ezek a jelzett antitestek felismernek egy RNS-DNS hibrid módon rövid láncok, amely független a nukleotidszekvencia DNS és RNS. Több ezer antitestmolekulák kiterjedhet egység genomiális HPV-DNS-hibrid.
Harmadszor, egyes immobilizált alkalikus foszfatáz enzim reagál a különböző molekulák hemilyuminestsenta dioxetán 1 perc, és okoz, így folyamatos a fotonok, amelyeket mindig számításba fotomultipleyernoy cső luminométer.
Negyedszer, géncsapda rendszerben van egy előnye a természetes erősítés, mint magában foglal egy nagy mennyiségű (10-20%) a klinikai anyagot a reakcióban.
A csapda használ egy hibrid RNS komplementer próba a teljes genomiális szekvencia és a 13 karcinogén HPV típusok 5 alacsony onkogén kockázata. Összeállított „koktélt” a magas és alacsony kockázatú volt. Mindegyik „koktél” külön-külön inkubáljuk a denaturált (egyszálú) DNS klinikai anyagból. Alakult RNS-DNS hibrid át a lyukakba a mikro panelek, amelyek immobilizált monoklonális antitestek DNS-RNS hibrid. Antitestek specifikusan felismerik a hibrid, amely csatlakozik a panel is. A csapdába ezáltal RNS-DNS hibrideket azután reagáltatjuk egy monoklonális antitesttel, hogy a hibrid alkalikus foszfatázzal jelzett, vagy mozgások az egyes lyukakhoz. A felesleges antitest és a nem hibridizált molekulák mosással eltávolítjuk. A lyukakat adunk lumineszcens szubsztrát dioxetán. Ha az aljzat elpusztult alkalikus foszfatáz, a fénykibocsátás. Fénykibocsátó mérhető luminométer alkalmazásával. A generált fény mennyisége arányos a számát a cél DNS-mintában.
Analitikai rendszer érzékenysége - 0,2 pg / ml (1000 HPV genom másolat).
A HPV a „Digene Hybrid Capture II” egy hatékony kiegészítőjeként nyaki citológiai és segíthet csökkenteni a megbetegedések és halálozások méhnyakrák.