Előadás - agglutinációs teszt (PA)
Ez az úgynevezett agglutináció baktériumok aggiutinációját kölcsönhatás révén specifikus AT. Ahhoz, hogy elvégzi a RA igényel három komponens: 1) AG (agglutinogén); 2) AT (agglutinin); 3) elektrolit oldatban (izotóniás nátrium-klorid oldattal). Az agglutinációs reakció csak részt korpuszkuláris antigének (baktériumok, eritrociták, latex-részecskék megrakott antigén).
Agglutinációs teszt üvegen. A fölözött objektív verem-lo pipettával csepp alkalmazott diagnosztikai szérumok (szérum hígítás 1:10-01:20). Bakteriológiai hurok veszi tiszta tenyészete a vizsgált mikroorganizmus a felülete a ferde tenyészetet átvisszük egy csepp szérumot és összekeverjük. Eredmény reakciók teszik a szabad szemmel 3-5 perc múlva. Ha pozitív választ a csepp szérum figyelmét megjelenése pelyhek (nagy vagy kicsi), jól látható sötét háttér ringató a diát. Abban az esetben, negatív-TION reakciót folyadék egyenletesen zavaros.
Agglutinációs teszt kémcsövekben. A csövek száma készült 1 ml sóoldatban. Az első kémcsőben hozzáadunk azonos térfogatú A vizsgált szérum. Készítsünk soros kétszeres hígítású szérum (szérum titrálással), majd be mindegyik csőbe 2 csepp szuszpenziót inaktivált baktériumok (Diagnosticum). A kémcsöveket 2 órán át termosztátban 37 ° C-on A reakció a formáció kis pelyhek, amelyek láthatatlan a szabad szemmel, így a rekordok az eredmények végezzük enyhe növekedése egy speciális eszköz - seroscopy. Az intenzitás a agglutinációs figyelembe szerint a „négy-plus”: teljes agglutináció - 4+ részleges agglutináció - 3+ vagy 2+, kétes eredmény - +. Az antitest-titer a vizsgálandó szérum hogy az utolsó hígítást, ahol agglutinációs 2+.
Agglutinációs reakciót kémcsövekben (kitekeredett agglutinációs reakció) végeztünk, hogy meghatározzuk a titerét antitestek patogének tífusz és paratífusz (Widal reakció), brucellózis (Wright reakció), tífusz (Weigl reakció).
Az agglutináció (lat agglutinatio -. Ragasztás) - ragasztására (kapcsolat) antigennesuschih korpuszkuláris részecskék (teljes sejtek, latexrészecskék, és mások.) Fajlagos antitest molekulák jelenlétében elektrolitok, azaz formában látható szabad szemmel, vagy iszappelyhek (agglutinálódnak). A természet a csapadék jellegétől függ az antigén: ostoros baktériumok így krupnohlopevidny csapadékot bezzhgutikovye és beskapsulnye - finom, kapszula - tyazhisty. Különbséget közvetlen agglutinációs, amelyben együtt specifikus antitestek közvetlenül részt saját antigének bakteriális vagy más sejtekben, például az eritrociták; és közvetett vagy passzív, amelyben-WIDE bakteriális sejtek vagy eritrociták vagy latex részecskék hordozók nem a saját, és a szorbeáló-fürdő őket az idegen antigének (vagy antitestek) kimutatására specifikus antitestek hozzá (vagy antigének). Az agglutinációs reakció részt főleg antitestek osztályába tartozó IgG és IgM. Ez történik két szakaszban: először is, specifikus kölcsönhatás az aktív centrum az antitest az antigénnel determináns, ez a lépés előfordulhat hiányában az elektrolitok és a nem kíséri látható változásokat a reagáló rendszerhez. A második szakaszban - oktatási-TION agglutinálja - kell rendelkeznie, az elektrolitok, amelyek csökkentik az elektromos töltés a komplex-Lex antigén + antitest és felgyorsítsák a ragasztás. Ez a fázis akkor ér véget forma-em agglutinálódnak.
Meg kell érteni, hogy oldatokat összekeverünk homológ antigének és antitestek nem mindig látható megfigyelt manifesztációk agglutináció. A képződött csapadékot csak bizonyos optimális arányt mindkét reakció komponensek. Ezen határokon kívül, a nagy feleslegben lévő antigén vagy antitest válasz figyelhető meg. Ezt a jelenséget nevezik „prozona jelenség”. Megfigyeltük, mint a agglutinációs reakció, és amikor a csapadék reakció. Előfordulás prozona a immunreakciókat, mert szóban forgó antigének bennük, általában polideterminantnymi és IgG antitest molekuláknak két aktív centrumokat. A feleslegben antitestek minden egyes részecske felületén bevont antigén ellenanyag-molekulák úgy, hogy nincs szabad meghatározó csoportok, így a második antitest nem kötődött aktív központot nem reagál a különböző antigén részecske és társítani őket egymással. A formáció a látható csapadékot vagy agglutinátumot szuppresszált az antigén feleslegben, ha nincs szabad aktív központja az antitest, és ezért az antigén komplexek + antitest + antigén már nem eldurvít.
Változatok a gyorsított agglutinációs reakciókra. A reakciót a passzív hemagglutinációs és variánsai
Klasszikus agglutinációs reakció használatával jár korpuszkuláris antigének. Azonban, az oldható antigének lehet vonni azt. Ahhoz, hogy ez lehetséges, az ilyen antigéneket adszorbeálva egy immunológiailag inert részecskék. Mivel a hordozó HÉA használ latexrészecskék vagy bentonit, de jelenleg a leggyakrabban használt, akkor eritrociták az állatok vagy emberek, javítva adszorpciós tulajdonságait tannin oldat kezelés, formalin vagy benzidin. A vörösvértestek adszorbeált magát az antigént, az úgynevezett sensibilizi-ment az antigén és az immunválaszt, amelyekben részt vesznek - a közvetett vagy passzív hemagglutinációs (Phragmites vagy PHA), mivel a vörösvérsejtek vesznek részt benne passzívan.
TPHA hozott különleges polisztirol lemezek lune, amelynek félgömb alakú alsó. Amikor a kamerát szerológiai diagnózis előállításánál félhold-TION Hígítson két-szeres sóoldatban vizsgáljuk, és ezután hozzá, mint diagnosztikai Kuma érzékenyített eritrociták szuszpenziót. Az eredmények értelmezése után végezzük 2 óra hosszáig inkubáltuk 37 ° C-on chetyrehkrestnoy rendszer. Amikor egy pozitív választ, hogy agglutinálja a vörös vérsejtek rendezi alján a félhold és egyenletesen bevonva azt a formáját egy fordított esernyő. Amikor a vörös vérsejtek is negatív reakciókat, hogy leülepedjen, a folyadék átlátszóvá válik, és a csapadék jelenik meg, mint egy kis „lemez” a közepén a félhold. Szérumtitere PHA tekinteni az utolsó hígítást, amely még mindig ad egy külön hemagglutinációban anélkül, hogy jelentős bizonyítéka a „lemez”.
PHA is használható, mint egy gyors módszer bakteriológiai diagnosztikai kimutatására közvetlenül az anyag ismeretlen baktériumok, vírusok, toksi-új, például sertés kórokozó Staphylococcus enterotoxinok és mások. Ebben a kiviteli alakban, a poszt-Novki TPHA ismert reakció komponensként felhasznált eritrociták adszorbeált nye jól ismert specificitása antitest - vörösvértest antitest diagnosztikai készlet. Ha a vizsgálati anyag tartalmaz elegendő mennyiségű ismert antigént TPHA pozitív.
Kiviteli alakok használata TPHA vannak: antigén semlegesítési reakció (RNAg) semlegesítő antitest válasz (Phat), passzív hemagglutinációs inhibíciós reakció (RTPGA). Mert ezek a reakciók használja antigén és antitest eritrocitán diagnosztikum. Lehetőség van használni egyidejűleg két, egymással controlling egyirányú reakciót a TPHA például antigén-NYM diagnosztikum és RNAg eritrocita antitesttel diagnosztikum.
Reakció semlegesítő antitestek (PHAT) abban áll, hogy a szuszpenziós, amely a kívánt antigént összekeverjük specifikus immun szérum antitesteket tartalmazó ismert a korom-lelő mennyiségben és inkubáljuk 37 ° C-on két órán át. Ezután a eritrocita antigén diagnosztikai kit. Az elegyet összerázzuk, és szobahőmérsékleten hagytuk. Az eredmények lehetővé teszik, 3-4 órán át, és végül -. 18-24 órán át, ha az anyagban van egy antigén, akkor kötődik antitestek (semlegesíti őket), és így hemagglutinációs nem történik.
Ugyanez az elv kerül semlegesítéshez antigén (RNAg). Csak ebben az esetben az anyagi antitestek kimutatására. Specifikus antigén adunk az ilyen vizsgálati anyag fogja megkötni az antitestek abban foglalt, azaz. E. Előfordulás neutralizáló antigénje antitestek, és ezért a hemagglutinációs ellenanyag hozzáadása-Erith rotsitarnogo diagnosztikum nem fordulhat elő.
Reakció koagglyutinatsii. Az egyik megvalósítási mód szerint a passzív, azaz. E. hengerállványhoz közvetített kami-hordozók gyorsított antitest agglutinációs reakciót az üveg. Ennek az alapja a reakció polo halasztva egyedülálló tulajdonsága a Staphylococcus aureus, amelynek részeként a sejtfal protein A kötődni az Fc-fragmenseket az IgG és IgM. Az aktív centrumok antitestek szabadon maradnak és kölcsönhatásba specifikus antigén determinánsokat. A témában-ing üvegcsepp felvisszük egy 2% -os szuszpenzióját staphylococcusok bevont megfelelő antitestekkel, és hozzáadunk egy csepp a vizsgálat baktériumszuszpenzió. Összhangban antigén antitestekkel 30-60 történik egyértelmű agglutinációs antitest betöltött staphylococcusok.
A reakció a latex agglutináció (LAS). antitestek hordozó e diagnosztikai rendszer kisebb standard latexrészecskék. Mikromódszer reakciót a lyukakban az üvegen. Az alapvető feltétele a sikeres készítmény PAH szigorú betartása mennyiségi arányának rendszer komponensei: 50 ul A vizsgálandó anyagot adunk 10 ul latex készítmény érzékenyített antitestek. A specificitás a PAH követtük, három pólusú „Roll vizsgálati szereplő kereskedelmi vizsgálati rendszerek: egyértelműen pozitív reakciót és negatív reakciót ismert minőségi kontroll-latex szuszpenziót PAH-érzékenyített NYM (nem ellenanyagokat hordozó) latexek vizsgálati anyag. Hazánkban, mint egy kopás-Leu specifikus ellenanyagok monodiszperz polisztirol latexek különböző átmérőjű részecskék, rami (0,3; 0,66; 0,75; 0,8 um). PAH használják a gyors kimutatására mikroorganizmusok vagy azok antigének a vizsgálati anyagot.
Az immun-antigének kimutatását. Az egyik kiviteli alak szerint a gyorsított reakció agglyuti-nemzet az üvegen tárgya a polimer szupermágneses bevont részecskék specifikus antitestekkel MI. Az egyik ilyen részecske kötődik a 107- 108 sejt a mikroorganizmusok, ezáltal a módszer érzékenysége eléri az 5 CFU / ml. Az immun-felismerés mikroorganiz-mov alkalmazhatunk kombinációban PCR.
Reakció aggregátum-hemagglutinációs (rága). Ez lehetővé teszi, hogy gyorsan érzékeli a betegek vérében, mint a szabadon keringő antigén (antigenemia) és antigének kapcsolódó antitestek - keringő immunkomplexek (CIC). Ragan használt vörösvértestek érzékenyített nye megfelelő antitestek. Hozzáadása a páciens vérszérumában, amely antigének érzékenyített vörösvértestek, amelyen rögzített antitestek vezet a ragasztási-vaniyu (agglutináció) az eritrociták és immunkomplexek.
Coombs antiglobulin (Coombs reakciót R.). Révén közvetlen reakció és passzív agglutinációt határoztuk komplett (bivalens) antitest. Hiányos (egyértékű, blokkolás) antitestek nem érzékeli ezeket a módszereket, mivel kapcsolódik az antigén, blokkolja, de nem okozhat az antigénreceptor nagy konglomerátumok. Hiányos (blokkoló) hívás antitestek, amely működik csak egy aktív hely; második aktív centrum ismeretlen okból nem működik. Kimutatására a teljes antitestek speciális Coombs reakció (ábra. 72). A reakció részt: a beteg szérumában, ahol annak meghatározása inkomplett antitestekkel korpuszkuláris antigén diagnosztikum antiglobulin szérumot tartalmazó anti-humán globulin. A reakció zajlik két szakaszból áll:
antigén kölcsönhatás inkomplett antitestekkel. Látható megnyilvánulásai van. Az első szakaszban a teljes mosási beteg szérum antigén maradékok.
Kölcsönhatás antiglobulin szérumot kapott egy állatot immunizálunk humán globulin, antitestek hiányos adszorbeált az antigénen. Annak a ténynek köszönhetően, hogy a kétértékű antiglobulin antitestek, kötődnek két különálló egyértékű antitest komplexek AH + hiányos antitest, amely azt okozza, hogy összeragadnak, és a megjelenése látható csapadék.
Még dolgoznak a biológiában