Gene diagnózis és génterápiás 1
Géndiagnosztikai nagy jövő a gyors diagnózis a fertőző betegségek. A fertőzés korai szakaszában, amikor antitestek a szervezetben még nem alakult ki, a diagnózis alapja a azonosítása Ar, beleértve az egyedi gének a kórokozó. Erre a célra az azonosítása a leggyakrabban alkalmazott módszer a hibridizáció és az amplifikáció DNS-t (lásd még CHAP. 11).
Típusú génterápia
Jelenleg kifejlesztett három fő típusa a génterápia, differenciált módszerével nyilvánított a vektor az érintett sejtek.
A génterápia exvivo. Az érintett sejtek izolálhatok páciens inkubáljuk a vektorral, majd a genetikailag manipulált (genetikailag módosított) szervezet sejtjeibe juttatjuk. A leggyakrabban használt módszer vérsejtek. Ez annak köszönhető, hogy a könnyű azok izolálása és ezt követő bevezetése a fordított.
A génterápia insitu. Ebben az esetben, a vektort közvetlenül adjuk be az érintett szövetbe. Például, cisztás fibrózisban szenvedő betegek adenovirális vektort közvetlenül a légcső és a hörgők; bizonyos tumorok közvetlenül injektáljuk a hordozó vektort citokin vagy toxin; az izomba a szenvedő beteg izomsorvadás, termelnek injekció vektorral, amely a disztrofin gén.
Az in vivo génterápia - vektort bevezetjük a véráramba. Eddig a gyakorlatban ez a módszer nem használható, azonban a módszer egyszerű és kényelmes, ezért tartják a legígéretesebb.
Amint fentebb jeleztük, a hordozó egy megfelelő gént egy sejtben használata különböző vektorokat [lat. vektor. hordozót]. A fő probléma a saját fejlesztés - leküzdése a címzett immunológiai akadályként befoglalja a különböző külső hatások, beleértve a bevezetését az idegen DNS a sejt genomjába. Ebben a tekintetben különösen érdekes a vírusok, mert az ismert anyagok csak ők képesek többé-kevésbé sikeresen integrálja a genetikai anyagot a genomba emberi sejtek. Ezért, minden erőfeszítés a génterápia szakemberek jelenleg koncentrálódik a géntechnológia területén a vírusok vektorként alkalmazunk, hogy a terápiás géneknek sejtekbe a beteg.
Alapuló vektorok RNS-vírusok -ovyh. A genomiális RNS-vírusok könnyen integrálható a genomba a gazdasejt, ezáltal lehetővé téve a hosszú távú expressziójára a kívánt gén. Ahhoz, hogy hozzon létre egy génterápiás vektorok a legígéretesebb retrovírusok. A részvételüket úgy ítélte meg, mintegy 60% -a az összes klinikai génterápiás próbálkozások.
Retrovírusok viszonylag ártalmatlan az emberre, kivéve természetesen, a HIV és a T-limfotropikus vírusok ember. A leggyakrabban használt egér leukémia vírus, mint egy vektor. A fejlesztés a vektorok összetételük teljesen kizárja kódoló gének szintézisét nyújtó termékek reprodukció. Kódoló transzgéneket kapacitása részeként a retrovirális vektorok nem haladja meg a 8000 bázispár nukleinsavak.
A fő probléma az RNS alkalmazásával virális vektorok - a hatékony szállítási genetikai anyag sejtek támogatják a hosszú távú expresszióját és transzdukciós a nem osztódó sejtek (a legtöbb RNS-vektorok képesek hatékony átadása a transzgének a nyugvó sejtekben). Azonban, a képtelenség, hogy retrovirális transzdukciója nyugalmi sejtekben egy adott helyzetben, és hasznos lehet, például a génterápiában a glioblastomák (agydaganatok malignus). Az az elképzelés, a kérelem a szelektív transzdukcióját osztódó sejtek a lézió - tumorsejtek és a vaszkuláris sejtek; idegsejtek nem osztódnak, és ezért nem szolgálhat célzott retrovírusvektorokat.
Alapuló vektorok DNS-vírusok -genomnyh. Vektorok, amelyek DNS-vírusokra alapozott rendelkeznek bЏlshimi méretei, mint a genomiális RNS-vírusok, és ezért tartalmazhat DNS-fragmenseket (transzgéneket) akár 35.000 bázispár.
• adenovírusok. Alapján adenovírusok létre vektorok génterápiára cisztás fibrózis, és in situ rák. Adenovírus vektorok képesek nagyon hatékony transzdukció egy nagy sor emberi sejttípus, ideértve a nem-osztódó sejteket. Külön figyelmet érdemelnek a vektorok alapján adeno-asszociált vírus. Adeno-asszociált vírus - nem patogén vírus elterjedt emberekben (AT annak Ag volt kimutatható az emberek 80%). Virus nyomvonal egy bizonyos része a genom - integrálja túlnyomórészt kromoszóma rövid karján 19. kísérletekben kimutatták, hogy hatásos a vektorok, amelyek alapján az adeno-asszociált vírus transzdukcióval agysejtek, vázizomzatban és a májban.
• Egyéb genomi DNS-vírusok. Többek között DNS-vírusok használnak viszonylag gyakran herpes simplex vírus (HSV), hogy mutat tropizmusával az idegszövet (rendre használt transzdukcióját agysejtek).
Nem virális vektorok (DNS-molekulát a tulajdonságait transzpozonok vagy közbeeső szekvenciák) kevésbé gyakori, mint a virális alapú vektorok. Azonban nem virális vektorok számos előnye van, mint például a biztonság és a könnyű szerkezet. Azáltal konstrirovaniya szintetikus rendszerek a szállítás a gének sejtekbe lehet elkerüljék a termelő rekombináns vírusban vagy más toxikus hatások.
Kilátásai génterápiás
Annak ellenére, hogy az alacsony a mellékhatások veszélye összefüggő génterápia, a géntranszfer hatékonyságának és azok ezt követő expresszióját a sejtekben továbbra is alacsony. Ez utóbbi annak köszönhető, hogy a nehézségek pontos azonosítását kódoló gének szintézisének bizonyos proteinek; nehézségek azok izolálása és kiválasztása a megfelelő vektorok. Ezért, a folyamatban lévő klinikai kísérleteket lehet meghatározni, mint a kezdeti lépés a génterápiás vizsgálatok. bevonásával egy nagyon korlátozott számú beteg. Ennek megfelelően, a korrigálására alkalmas módszereket genetikai „hiba” kell fejleszteni tekintetében súlyos betegségek (rákok, örökletes betegségek, szerzett immunhiányos (AIDS-szindróma), autoimmun rendellenességek, ischaemiás szívbetegség). Ugyanakkor a felhalmozási információkat génterápia és tévhitek az alacsony a mellékhatások veszélye létrehozhat veszélyes végrehajtásának feltételeit a génterápiás módszerek a betegségek kezelésére közvetlenül nem veszélyezteti a beteg életét, korrekciója kozmetikai hibák és javítja az általános állapota a test. Például, génterápiás módszerek alkalmazhatók a kopaszság kezelésére, valamint a gén transzdukcióját növekedési hormon vezethet az organizmus növekedését, a disztrofin gén - izomtömeget. Az ilyen komolytalan kísérlet történt génterápiás kell megközelíteni rendkívül óvatosan - a tudósok és orvosok egyetértenek abban, hogy a támadás a humán genom jelenleg engedélyezett csak szélsőséges esetekben, amelyek az életveszélyes állapot. Az orvosi közösség nem lehet teljesen biztos hiányában génterápiás távoli negatív hatásokat. Ugyanezen okokból nem alkalmazható génterápiás szexuális sejtekben.
· A tanítás fertőzés
Ez a fejezet a kérdések jellemző virulencia és patogenitásának mikroorganizmusok tényezők kórokozó és virulencia tulajdonságait fertőzés lefolyását és járványtan a fertőző betegségek.