Eljárás állati célra szánt proteolitikus komplex előállítására
MEGJEGYZÉSEK ÉS NYITÁSOK
19/00. Adja. 1973-tól.
A Szovjetunió N 334720 számú szabadalma, kl. C 12 N 9/52. Adja. 1970. (54) A ZÖTECHNIKAI ALKALMAZÁSRA VONATKOZÓ PROTEOLITIKUS KOMPLEX TARTALMAZÁSÁNAK MÓDSZERE
A találmány tárgya a biotechnológia és a felhasználásra szánt állattenyésztési technológia, a találmány tárgya â € „javítva a teljes proteolitikus aktivitás miatt a túlsúlya a komplex típusú és a proteáz és segítsék elő a növekedési során az állatok etetésére vagy a terhesség alatt.
A módszer a következő.
Erjedés. Egy törzset használnak
Streptomyces fred (ac, típusú törzs
Waksman 3535 tárolt American Type Culture Collection ATCC szám alatt 10.745, ez a törzs lehet időszakonként regenerálni klasszikusan N és> 1701 január 13 3AZ (I) 5 C 12 N 9/52 // A 23 K 1/165 (C 12 és (57) A találmány tárgyát biotechnológia képezi, és a tenyésztéstechnikában alkalmazható. A cél a találmány szerinti â € „javítják az általános prateoliticheskoy aktivitása miatt az uralkodó komplex proteáz típusú ll u biztosítása gyorsabb növekedése során az állatok etetésére vagy a terhesség alatt. A proteolitikus komplex előállítására szolgáló eljárás a Streptomyces törzs tenyésztését jelenti
Készítsünk egy előtenyészet a törzs az első lombikban keverés közben, majd a köztes fermentorba, majd olyan fermentorba oltottuk hajtjuk ipari termelés, a termelési tápközeg összetétele a következő: g / l; 15 szójabromot, glükóz 30. dikálium-foszfátot
1; 10. A sterilizálás után a pH-értéke közel 7,0, a fermentációs hőmérsékletet 28 ° C-on tartják,
55 0,3 térfogat steril levegőnként 1 térfogat közegre 1 percig.
A közeg pH-ja, kezdetben közel 7,0, csökkenni kezd, és körülbelül 10 óra fermentációs idő eltelik
6,5, akkor gyorsan növekszik, és körülbelül 20 óra fermentációs idő után eléri a 7,5 értéket, majd lassabban növekszik, amíg elérik a 8,2 végső értéket.
Fontos, hogy a pH-t 75 "
7,0 automatikus hozzáadásával savas oldatot (3 n.solyanoy sav), így elkerülhető a micélium fragmentációja és izolálását közeg bizonyos másodlagos metabolitok típusú proteázok, l, 1b és peptidázok (ezeket a szekunder metabolitok, továbbá ezek az enzimek maradhat intracelluláris) növekedése a 11-es, ill, I típusú proteázok, amelyek főként extracelluláris enzimek termelik, jelentősen növelik a 11. típusú proteáz termelését
A fermentációs idő 72 és 96 óra között változhat, és a végső közeg titere körülbelül 15 000 lehet
0.A. / ml, ami jóval meghaladja az ismert titer (3000 U. A. / ml) Egység Apzop1sokraschenno U.À,) úgy definiáljuk, mint az az enzimmennyiség, amely inkubáljuk 10 percen át 25 C-on és pH 7-nél, 5 jelenlétében denaturált HB, elválik ez a szubsztrát a ekvivalens 1 ug tiroeina, a vékonyított yaemy spektrofotometriás abszorpció 280 nm-en, a szűrletet nem kicsapjuk triklór-ecetsavas extrakcióval, micéliumot elválasztottuk a termelési tápközeg tisztázásával szűréssel, komplex helyett annak extraháljuk klasszikus met Enzimizoláció (szekvenciális kicsapás, oszlopvezetés), ultraszűréssel extrahálva.
A membránokat az UF, amelyek küszöbértéket szétválasztás megfelelő molekulatömege 30.000, nem alkalmasak, mivel azok át több, mint 50% -a komplex, membránok, amelyek egy küszöbértéket elválasztás, a megfelelő molekulatömeg
Az ultraszűréssel előállított koncentrátumot ezután permetezzük.
Proteolitikus enzimek komplexét kapjuk világos bézs por formájában, amelynek titere legalább
A teljes hozam a proteolitikus aktivitás, ami körülbelül 70% -kal magasabb, mint ami előállítható az iparban az egymást követő felvitellel vagy úgy halad át az oszlopon, jellemzői az új komplex: jelenlétében (meghatározott fermentoelektroforezom) proteázok a II típusú, beteg, IV NPU kizárási Proteae típusú 4 Ib és peptidáz; â € „túlsúlya proteáz típusú 11, ami azt jelenti, legalább 40% a teljes proteolitikus aktivitást, a proteáz beteg vagy a IV típusú jelentése egymástól legfeljebb 30% a teljes aktivitás.
A komplex fő proteázainak jellemzői, a 11. proteáz típusú molekulasúly közel 18 000; az izoelektromos pont közel 9,0; elektroforézissel pH-n keresztül
8.0 viszonylag gyenge sebességgel mozog a katódra.
Proteáz típusú Ill. A molekulatömeg közel 14 000; az izoelektromos pont közel 9; 8 pH-nál elektroforézissel, átlagosan a katódra költözve.
1-es proteáztípus, a molekulatömeg közel 16500; az izoelektromos pont közel 9,0; elektroforézissel pH-n keresztül
8.0 mozgás a katódhoz viszonylag nagy sebességgel, fl er m e. S. törzs tenyésztése
fradiae ATCC 10745, amely a fermentor első beoltását végezte teljes térfogattal
2 m, hasznos térfogata 1 m3. A horgolt inokulumot 30 m-es kapacitású és 20 m hasznos kapacitású ipari fermentor termesztésére használják,
A fermentációs tápközeg a következő összetételű, 20 m-es,
Szójabab 300
Kalcium-karbonát 200
A fermentálás előtt a tápközeget sterilizáljuk és a pH 7,0-ra állítjuk, fermentációs hőmérséklet van beállítva 28 1 C tápközeget levegőztetjük fermentáció során a keringő steril levegőt 0,3 térfogat 1 térfogat közeg 1 perc. A fermentációt körülbelül 72 órán keresztül végezzük, miközben a pH-értéket 7,0-7,5 értéken tartjuk 3 N sósav szisztematikus hozzáadásával.
72 óra elteltével a proteolitikus komplex koncentrációja a közegben 15 000
Extraction. A tenyésztőközeget egy klaszteren szűrjük át egy klasszikus szűrőprésen 10 m-es szűrőfelületen.
A kapott bézs por ipari keményítővel kombinálva.
Az ultraszűrő készülék az UFP 10 márkájú, a Ron-Poulenc által gyártott legnagyobb kereskedelmi eszköz.
Az ultraszűrő eszköz betáplálását egy kisülő szivattyú segítségével végzik, és a kiömlőszelep kinyitásával szabályozható. amely megtartja az előre beállított nyomást, az optimális táplálás pedig 1000 l / m h.
Alkalmazás a javasolt komplex zootechnikusánál a legjobb eredményekhez vezet, ha azokat az alábbi feltételeknek megfelelően végzik.
A 40-et jobban osztályozzák, mert izmosabbak és kevésbé zsírosak, de ezek a javítások szabálytalanok voltak.
Terhesség, etetés és elválasztás alatt emlősöknek szánt takarmányok használata A javasolt komplex stimulálja a hasnyálmirigy exokrin aktivitását.
Ezt a stimulációt különösen egy patkányon végzett kísérletek igazolják, és a hasnyálmirigy-csatorna által kiváltott enzimek intra-pankreatikus koncentrációjának jelentős emelkedésében fejezzük ki. Ez a növekedés elérheti az 50% -ot az amilázra, 70% a háromlábú csigát és a kimotripszinogént, a lipáz 80% -át.
A hasnyálmirigy aktivitás exokrin stimulációjának hatása
3 „rad úgy véli, hogy a komplex bude.g különösen ef kaludschnOY mirigy (nők a terhesség késői szakaszában) LLI szükség esetén intenzív” „fitsirsvat 88 tevékenység
Reprodukció (nőstényekben nagyszámú Otomosti szoptat), vagy acetaptáció esetén (fiatal emlősöknél az időszak alatt
") Megvan a QT mellem). Kövesse! A "d!
IWA = 17 p. Dsbaalanya f