Eljárás lizozim előállítására
Felhasználás: biotechnológia, élelmiszeripar és orvosi ipar. A találmány szerinti cseppfolyósítási tojás fehérje frakciót adunk 0,6- 1,4% ammónia-oldatot. Izolálása lizozim végzi szorpciós, történhet egymást áthaladó szorbens silohrom márka SG-CX, kiindulási előre egyensúlyba hoztunk oldószerrel, amely a használt 0,6-1,4% -os ammónium-hidroxid-oldattal. fehérje-oldattal és ismét a kiindulási oldószerben, majd eluálást lizozim 0.8-2,0% ecetsav oldattal, 0,1-0,3 M nátrium-klorid, majd a lizozim oldatot bepároljuk, üreges rostok. 70 L,
(5!) 5C 12N 9/36. A 23 J 1/08
Orosz Föderáció bizottság Szabadalmi és tovariymznakam (21) 5000076/13 (22) 01.08.91 (46) 15,02.93. Bull. N. 6 (71) Az orvosok fejlett képzési központja (72) VN Morozov, SA Samarin. E.G.Scherbakova, T.P.Zhuravleva, S.S.Zhukov, V.P.Chuprunov és A V.Kuchmy (73) Központi Institute of Advanced Medical (56) M számú francia szabadalmi 256.972, cl. C 12 N
9/36, közzétéve 1985.
M 7123438, kl. C 12 N 9/36, 1977, (54) A LYSOCYM MEGADÁSÁNAK MÓDSZERE
A találmány biotechnológiai, élelmiszeripari és orvosi iparra vonatkozik. különösen a csirke tojás fehérjéből lizozim előállítására szolgáló technikával. A lizozimot gyógyszerként élelmiszer-adalékként és a tejiparban használják a gyermekek és a terápiás táplálkozás védőanyagainak dúsítására.
A találmány célja a folyamat egyszerűsítése.
„CX-CALL”, előre egyensúlyba kiindulási alkalmazott oldószer, mint a D-edik 0,6-1,4 ammónia oldat, a fehérje oldatot, és kezdje újra az oldószert, majd PLN yutsiey lizozim elegyet 0,8-2,07--os ecetsavat 0,1-0,3 mól nátrium-kloriddal, majd a lizozim oldatot üreges szálakra koncentráljuk. majd lizozim-ligálást végzünk egy keverékkel
0,8-2,0% ecetsav oldattal
0,1-0,3 M nátrium-kloridot, majd a lizozim oldatot koncentráljuk és diafiltráljuk üreges szálakon.
Először a lizozim elkülönítésére szorbens, makropórusos szilikagél, szilikróm "CX-ZV"
GOST 10973 vagy 38,101832-80 TU, amely egy gyenge kationcserélő alapú bursilikatnogo üveg. Silohrom „CX3B” van egy nagy áteresztőképességű, nem tömörített, nem deformálódott, nem tartoznak a biológiai lebomlás, megoldódott a probléma a kémiai sterilizálás, L Jelenleg van egy hazai gyártó termelő nedvszívó a kívánt mennyiségben a javasolt határozat tehnichesko.l dolgozott szorpciós körülmények lizozim; és a szorbensen 0,6-1,4%
A tyúktojás fehérjét folyadék homogenizátorral csepegtetjük, és 0,6-1,4 ammónia oldattal keverjük 1: 5 arányban. A tojássárgának a fehérjebe való bevétele elfogadhatatlan, még kis mennyiségben is, mivel ez a szorbens megromlását és a lizozim aktivitásának csökkenését eredményezi. Az így kapott fehérjeoldatot durva szűrőkön (vagy gézben, több rétegben hajtva) szűrjük.
A lizozim izolálására ipari minta kromatográfiás oszlopát alkalmazzuk; átmérő 150 mm, magasság 720 mm, kapacitás 12,8 liter. A takarmány az oszlopba, perisztaltikus pumpa használatával oldatok NSR-15 M, nyomkövető hozam a fehérje frakció alkalmazásával végezzük áramlási UV detektorral „Volcord $ LL” LKB gyártott (Svédország), beállítjuk a hossza a továbbított fény 280 nm-en. A "CX-3B" szorbens szilikrommal töltött oszlopot a kiindulási oldószerrel egyensúlyba hozzuk. amelyet 0,6-1,4-es ammónia oldatként használnak. Ezután a kapott fehérjeoldatot egy szivattyúval egy oszlopba szivattyúzzuk.
A szorbens csomagolását követően ugyanazzal a kiindulási oldószerrel öblítse le, amíg a nem-szorbeált fehérjék csúcsa ("áttörés") teljes mértékben felszabadul. A lizozim eloszlása a szorbensből az oszlopon keresztül 0,8-2,0%
55 ° C-os ecetsavoldatot 0,1-0,3 mólos nátrium-klorid-oldattal a lizozim teljes elúciójáig. A lizozimot tartalmazó eluátumfrakciókat összegyűjtjük, diafiltráljuk és egyidejűleg egy üreges szálas ultraszűrő egységre
UPV-6, steril csomagolású injekciós üvegekben és szárított fagyasztva szárítva. A lizozim teljes ciklusa 3-4 napig tart, míg a kromatográfia 10-14 órát vesz igénybe.
1. példa A tojások 1000 tojását (30 liter) cseppfolyósítjuk áramlási homogenizátorral, és 0,6% -os ammóniaoldattal keverve 1: 5 arányban. Az így kapott fehérjeoldatot durva szűrőkön (vagy több rétegben hajtogatott gézzel) átszűrjük. A lizozim izolálásához ipari minta kromatográfiás oszlopát alkalmazzuk: átmérő
150 mm, magasság 720 mm, kapacitása 12,8 liter. Az oszlopon lévő oldatok táplálására az NSR-15 perisztaltikus szivattyú
M1 A fehérjefrakciót az LKB (Svédország) "Volcord Sll" ultraibolya áramlásérzékelő felügyeli. 280 nm átviteli fényhosszúságra hangolt. Az oszlopot "CX-ZV" szorbens szilikrommal töltjük meg, és egy oldószerrel egyensúlyba hozzuk, amely 0 6 ammóniaoldatot használ. A kapott fehérjeoldatot szivattyúval szivattyúzzuk az oszlopba. Miután lieotsima a szorbens kiindulva végezzük mosó oldószer a teljes hozam az oszlopról nesorbirovavshihsya proteinek ( „áttörés”). A lizozim elúciójához 0,1 mólos nátrium-klorid-oldattal 0,8-ecetsavoldatot pumpálunk az oszlopon, amíg a lizozim teljesen eluálódik.
Frakciókat tartalmazó eluátumot lizozim, egyesítjük, diafiltráltuk és bepároljuk egyidejűleg az üreges rostos ultraszűrő egység OLA-6, sterilen csomagolt fagyasztva szárított és vlakony. A kapott termék homogenitását elektroforézissel igazoltuk gradiens poliakrilamid gélben. A lizozim 9601060 EDlmg aktivitása, amely megfelel a specifikációnak
Tehred M. Morgenthal korrektor S. Lisina
NGO "Keresés Rospatent
113035, Moszkva, Zh-35, Raushskaya Nab. 4/5
Termelés és Publishing „Patent, Ungvár, Gagarina 101 létrehozza a szűrt fehérje kiindulási alkalmazott oldószer, mint 1,4 ammónia-oldatban, oszlop szorbens silohrom” CX-szennyező anyagok „kapott fehérje oldatot fecskendeznek. Ezután végzik a mosást kiindulási anyagként ugyanazt az oldószert, amíg a teljes hozam az oszlopról nesorbirovavshihsya proteinek ( „áttörés”). Zlyutsiyu lieotsima a szorbenssel végezzük keverékével 2 (, Nogo ecetsav oldatot 0,3 M nátrium-klorid, lizozim összegyűjtött eluátumot koncentráljuk, és sómentesítettük padlók olokonnoy ultraszűréssel. szétosztjuk, és fagyasztva szárítjuk. A kitermelés 65,3 g lizozim termék homogénnek meghatározásakor elektroforeeom poliakrilamid gélen.
Activity lieotsima Edlmg 1000, ami megfelel a Tu 64-3-208-85 loroSposob lizozim-termelő lizozim hígítása a fehérje frakciót a tojásokat, a kezelés egy lúgos oldattal, és az így kapott oldatot a lizozim IE. a levéltetvek és h és w shiysya, hogy annak érdekében, hogy egyszerűsítse a technológiai folyamat, mivel a lúgos oldat 0,6-1,4 ny ammónia-oldatot, és a szelekciót úgy hajtjuk végre, hogy szorpciós végzett. sokk. Az akvizíció ciklusa 4 napig tartott, kromatográfiával - 14 óra.
Így a javasolt módszer a következő előnyökkel jár:
5 1. Lehetővé teszi a technológiai folyamat egyszerűsítését: a céltermék 12 és 3-4 nap közötti elosztásának időtartamát lerövidítheti, hogy kizárja a több lépcsős, 10 nagy konténerek használatának szükségességét, lehetővé téve a lizozim hűtés nélküli izolálását.
2. Használja a hazai olcsó szorbent a céltermék elosztására, 3. Csökkentse a munkaterületeket.
4. Lehetővé teszi a sókompozíció varrását a szennyvízben.
20 soros áthaladást silohrom SG-CX, előre egyensúlyba kiindulási rastvroritelem, amelyet használnak, mint a 0,6-1,4 ammóniaoldattal, és a fehérje-oldatot ismét startovgo oldószerrel, majd az eluálást a 0,8-2,0 lizozim-Nogo ecetsavoldattal 0,1-0,3 M nátrium-klorid, ami után lieotsima oldatot bekoncentráltuk és a diaszűrést üreges szál.