A hidroxipropilénben gazdag fehérjék és a kozmetikai készítmények

A találmány hidroxi-propilénnel dúsított glikoproteinekre vonatkozik, amelyeket növényi forrásokból lehet előállítani, valamint gyógyászati ​​és kozmetikai felhasználásukra.

Ismeretes, hogy bizonyos állati eredetű glikoproteinek, például kollagén és proteoglikánok kedvező hatással vannak a bőrre, ha ezeket helyileg alkalmazzák, vagy megfelelő készítményekbe beépítik.

A kollagén, amely egy glikoprotein gazdag prolin és hidroxi-prolin, különösen használhatók önmagukban vagy kombinálva más polipeptid bázisok kezelésére ráncok és más nem esztétikus foltok kapcsolódó rossz a bőr hidratáltságát és rugalmasságát. Az állati kollagén vannak korlátai annak használata miatt a szennyeződés kockázatát a vírusok és toxinok. Bár a vegyületek növényi eredetű nem járnak ilyen kockázat, mostanáig ezek alkalmazása kozmetikai már meglehetősen korlátozott: például kozmetikai készítményekben ismeretes, amelyek a nyers kivonatok az ilyen növények például Aloe, vagy akár egész őrölt növényi termékek, mint például az avokádó.

Ismert növényi glikoproteinek nevezett estensinami amely származó növényi sejtek proliferációs fázisban, és amelyek szerkezete hasonló az állati kollagén. Az EP-A-05334078 leírja a kozmetikai alkalmazása extensines, amelynek átlagos molekulatömege nagyobb, mint 100000 dalton. Azonban, a módszerek extensines extrakciót az eddig leírt, amelyek magukban foglalják a növényi anyagok különböző eredetű útján vizes sóoldatok, amelyet tisztítás követ az erős savakkal, mint például triklór-ecetsav, nem teszik lehetővé olyan alkalmas termékek kozmetikai, problémák miatt kapcsolatos oldhatósági, ismételhetőség és kémiai-fizikai tulajdonságaik megmaradása.

Azt tapasztaltuk, hogy hidroxiprolin-gazdag glikoproteinek előállítása lehetséges, amelyek szerkezetileg hasonlóak a fentebb leírt extensinekhez, de kisebb molekulatömegűek. súly és nagyobb oldhatósága savas vizes oldatok, a folyamat, amely tenyésztést in vitro sejtek kiválasztott növények és az extrakciót sav-alkohol oldatok növekvő sejteket megfelelő környezetben.

A glikoproteinek szerint előállítható a találmány hidratáló, filmképző, tonizáló és elősegítő hegképződés tulajdonságai magasabb szintű, mint a kollagén. A glikoproteinek a találmány ezért felhasználható a kozmetikai vagy dermatológiai készítmények a száraz bőr kezelésére, a psoriasis, ichthyosis, korpásodás, keratosis, ráncok, akne, ekcéma, gyulladásos dermatózis, a bőr öregedését és minden más esetben, a várható használatát az állati kollagén.

A találmány szerinti glikoproteinek vizes oldatai stabilak maradnak anélkül, hogy a glikoproteinek bármilyen polimerizálódása vezetne oldhatatlan termékek kialakulásához. Ezenkívül ezen oldatok viszkozitása különösen magas, és nem függ a koncentrációtól; A 0,1% -os koncentráció nem várt módon ugyanolyan filmképző és hidratáló teljesítményt mutat, mint az 1% -os kollagén vagy az 5% -os növényi albumin oldatai.

Növényi szövet kalluszokat alábbi sterilizálási és opcionális hozzáadásával antibakteriális szerek szokásosan alkalmazott inokulum Megfelelő folyékony táptalaj leírtak a fent említett kézikönyvben Dobbs és Roberts. Különösen alkalmas szűrőanyag a találmány szempontjából a Murashige és Skoog szerdán. A kívül adott adalékok, mint például prolin, redukálószerek, etilén- vagy kibocsátására képes vegyületek az etilén, mint például etefon vagy L- aminotsiklopropankarbonovaya sav, alkalmas lehet, hogy a termelékenység növelése, vagy a termelés a kívánt glikoproteinek.

Előnyös, ha a naftil-ecetsavat, például auxint, 6- (dimetil-amino) -purin citokinint, vitaminokat és 3% szacharózt alkalmaznak szénforrásként.

A kiválasztott anyagtól függően előnyös lehet C-vitamin hozzáadása annak érdekében, hogy a végtermék barna színű legyen.

A fermentációs idő 3-12 nap lehet, és előnyösen 5-6 nap. Azonnal befejezésekor a fermentációs táptalajt centrifugáljuk és a sejt masszát extraháljuk alkoholt, előnyösen etanolt, jelenlétében hígított ásványi savak, előnyösen sósav vagy kénsav. Ez az eljárás inaktiválja egyes enzimek, amelyek stabilitását veszélyezteti a glikoproteinek a találmány szerinti, különösen, polifenoloxidáz tirozinoksidazu és amelyek elősegítik a polimerizációs glikoproteinek a kialakulása követ, oldhatatlan termékek.

Az alkohol kivonása ásványi savak jelenlétében lehetővé teszi a fő glikoproteinek teljes extrakcióját, és végső soron rendkívül szelektív. Az etanol mellett egyéb vízzel elegyedő alkoholok, például metanol vagy izopropanol is alkalmazható. A kapott vizes-alkoholos extraktumokat semlegesítjük, majd bepároljuk, és a hőmérsékletre melegítjük 70-100 ° C, előnyösen körülbelül 80 ° C, akár teljes kicsapódását a denaturált fehérjék. A szuszpenziót ezután koncentrálással tisztítjuk, és a folyadékot frakcionált ultraszűrésnek vetjük alá a nagy molekulatömegű és kis molekulatömegű anyagok eltávolítása céljából. Az ultraszűrést végzünk poliszulfon membrán, amelynek molekulatömeg cut-off 10,000-40,000 dalton, mint például Centricon R vagy Romicon R. szálak, amelyek lehetnek üregesek vagy, alternatív módon, felcsévélhető. A kapott szűrt terméket elektrodiálissá tettük a nemkívánatos anyagok, például sók és kis molekulatömegű cukrok eltávolítására. Szűrés után és a dialízis, a kapott oldatot lehet használni, mint például a kozmetikai vagy gyógyszerészeti készítmények vagy lehet koncentrált kisebb térfogatra, majd liofilizáljuk, vagy finomra őrölt.

Aminosav - csúcs területe,% Asp - 4,399 Glu - 4,328 Hyp - 17,505 Ser - 7,065 Gly - 6,056 Hys - 1,782 Arq - 2,471
Thr - 4,739
Pro - 10,036
Ala = 8,2
Vontatóhajó - 2.388
Val: 6,162
Met - 1,154
Ile - 2.479
Leu - 5,525
Phe - 1,862
Lys - 14, 254
A fenti adatok a glikoprotein keverékben jelen lévő összes aminosav százalékos arányára vonatkoznak. Ebben a keverékben a cukrok arabinóz és galaktóz. Az aminosavak és a cukrok aránya átlagosan 2: 1 a különböző termékek esetében.

Amint fentebb említettük, a találmány szerinti termékek mind gyógyászati, mind kozmetikai alkalmazásokban alkalmazhatók. Gyógyszerek esetén a készítményt gélekbe vagy kenőcsbe építhetjük be, vagy orvosi gyógyszerként alkalmazhatjuk égések vagy sebek speciális kezelésére. Ebben az esetben a terméket rendszerint sterilizálják vagy sterilen szűrik és liofilizálják.

A találmány szerinti kozmetikai és dermatológiai készítmények a szokásos eljárások szerint állíthatók elő. Az adagolási formákra példaként említhetők a vizes permetek, folyadékok, oldatok, emulziók, gélek, kenőcsök és krémek.

A kozmetikai és dermatológiai készítmények a találmány szerinti tartalmazhatnak hidroxiprolinban gazdag glikoproteinek mennyiségben körülbelül 0,01-körülbelül 50 tömeg.%, Előnyösen 0,05 és 5 tömeg.%, Valamint a hagyományos segédanyagokat. Ezzel a magas stabilitást a glikoproteinek a találmány szerinti, gyógyászati ​​és kozmetikai készítmények, amelyek több, mint 50% az oldható hidroxiprolinban gazdag glikoproteinek nyerhetők.

A találmány szerinti glikoproteinek a gyógyászati ​​és kozmetikai készítményekhez hasonlóan adhatók hozzá, vagy mikrokapszulázhatók oly módon, hogy hosszú távú hidratáló hatást biztosítsanak. A mikrokapszulák lehetnek hidrofilek vagy lipofilek. A találmány szerinti készítmények tartalmazhatnak más olyan hatóanyagokat is, amelyek komplementer vagy hasznos hatással rendelkeznek a kívánt célra.

A találmányt a továbbiakban a következő példákkal szemléltetjük.

1. példa
A kallusz és a folyékony kultúra Gingko biloba kinyerése glikoproteinek előállításához
Készítünk explantátumot fiatal levelek a Gingko biloba levelek mosással 0,1% Tween 80-at (Tween 80 R). Levél pengék szakaszokra vágjuk körülbelül 0,5 cm és előre sterilizált 1 percig 75% -os etanollal. Ezután a sterilizálás befejeztével egy 2% -os nátrium-hipoklorit-oldatot és tripla mosása az explantátum steril vízben. A kapott explantumokat egy Petri-csészébe a Murashige & Skoog közeg, amely 3% szacharózt, azzal a kiegészítéssel, Lynsmeyer & Skoog vitaminok és hormonok, így például 2,4-diklór-fenoxi-ecetsav és naftil-ecetsav. A termékeket sötétben inkubáljuk 23 ° C-on 20 napig. Végén ezen időszak, morzsalékos kalluszokat kapunk, amely nő könnyen és fejleszteni folyamatos sorokban során átoltással azonos körülmények között, amelyben fel lehet használni szaporításra folyékony közegben. Calli használt innokulirovaniya-es Erlenmeyer lombikban 200 ml Murashige és Skoog tápközegben kiegészített naftipuksusnoy savval és 6- (, dimetil-amino) -purin, Lynsmeyer & Skoog vitaminok és 3% szacharózt szénforrásként. A lombikokat keverés közben folyamatos fény 4 napig, ami után a sejt biomasszát begyűjtöttük a kitermelés az glikoproteinek.

2. példa
A Gingko biloba sejtek glikoproteinek kinyerése
Az 1. példa szerint előállított tenyészetből 5 1-et alacsony sebességgel centrifugáltunk, és az összegyűjtött sejteket (1,5 kg nedves tömeg) 1,5 liter 70% -os etanollal extraháltuk, amely 1% kénsavat tartalmazott. Az extrahálást kétszer megismételjük, ezáltal kvantitatív módon kivonjuk a fő glikoproteineket. Semlegesítés után az extraktumokat leszűrjük a zavarosság eltávolítása céljából, és vákuumban 50 ° C hőmérsékleten koncentráljuk, amíg az etanol teljes eltávolítása meg nem történik. A vizes koncentrátumot 85 ° C-on 30 percig melegítjük, majd ismételten centrifugáljuk, hogy eltávolítsuk a kivált csapadékot. A kapott tiszta oldatot ultracentrifugáljuk Centricon R membránnal, 40 000 dalton határértékkel, hogy nagy molekulatömegű anyagokat kizárjanak.

4. példa
Kozmetikai készítmény
100 g olaj-a-víz emulzió tartalmaz, g:
A 2. vagy 3. példa szerinti megoldás 10,0
Acetilezett lanolin-alkohol PEG-10-2,0
Cetil-sztearil-alkohol - 1,5
Cetil-palmitát 2,0
Sztearinsav - 7,0
Oktil-oktanoát 7.5
Kálium-cetil-foszfát - 0,5
Tartósítószerek - Szükség esetén
Íz - Ha szükséges
Tisztított víz - Mennyit kell 100-ig
5. példa
Kozmetikai készítmény
100 g olaj-a-víz emulzió tartalmaz, g:
A 2. vagy 3. példa szerinti megoldás 10,0
Cetil-sztearil-glükozid - 5,0
Jojobaolaj - 10.0
Izopropil-mirisztát 8.0
Dimetikon - 0,5
Antioxidáns - Szükség esetén
Tartósítószerek - Szükség esetén
Íz - Ha szükséges
Tisztított víz - Olyan mennyiségben, amely 100-ra van szükség
További kísérleti adatok.

6. példa
Kozmetikai készítmény
Vízoldat, g:
A 2. vagy 3. példa szerinti keverék oldatát
Imidazolidinil-karbamid - 0,30
Metilparaben 0,20
Hidroxietil-cellulóz - 2,00
7. példa
Kozmetikai készítmény
Gél, g:
A 2. vagy 3. példa szerinti keverék oldatát
Propilénglikol, diazolidinil-karbamid, metil-parabén, propil-parabén-1,00
Tisztított víz - Szükség esetén 100 ml-ig

2. Kozmetikai készítmény bőrhidratációra, amely hatóanyagként az 1. igénypont szerinti glikoproteinek keverékét tartalmazza.

3. A 2. igénypont szerinti kozmetikai készítmény vizes permet, lotion, oldat, emulzió, gél, kenőcs, krém formájában.