A nemi úton terjedő fertőzések laboratóriumi diagnózisa
Színes készítmények mikroszkópos vizsgálata
A hüvelyi trichomonadák kimutatására a kenetet a rögzítés után az anyaggal különféle módszerekkel lehet megfesteni, egyszerre egyszer festés egy színnel és komplexummal - különböző színezékekkel festve. A festést követően a keneteket mikroszkóposan végezzük egy merülő mikroszkóp rendszer alkalmazásával és 500-1000-szeres teljes nagyítással. Az anyagot steril szondából vettük ki a sérülésekből, és egy tiszta, zsírtalanított üveglapra vittük fel egy egységes vékony réteggel. Légszárítás után a készítményeket 3-5 percen keresztül metanollal, vagy 96% -os etil-alkoholban vagy Nikiforov keverékben rögzítjük. Leggyakrabban a következő festési módszerek használatosak:
1. Romanovsky-Giemsa festése. A fix készítményt helyezünk egy működő színezék oldatot (készletek színezék oldatot desztillált vízzel meghígítjuk az 1:10 arányban) a 25-60 percig, majd vízzel mossuk, szárítjuk, és mikroskopiruyut immerziós rendszer. Kernel Trichomonas festett lila vagy lila-rubin szín, a protoplazma - kék, blefaroplast, csilló, aksostil és kromatin szemes protoplazma festett rózsaszín vagy piros;
2. Festés 1% -os vizes metilénkék-oldattal (1 g metilén kék 100 ml desztillált vízben oldva, papírszűrőn szűrve). A készítményt alkalmazva 1% -os metilénkék 1 percig, majd alaposan leöblítjük áramban színezék visszamaradó hideg vízzel mossuk, szárítjuk és mikroskopiruyut. A gyógyszer kék. Különböző intenzitású kék színű bakteriális növényi foltok. Trichomonas vaginalis különböző formájú található a nyálka közötti sejtes elemek - héj világosan látható, a mag excentrikusan elhelyezkedő, intenzív színű kék, a protoplazma tender, háló, világoskék, színtelen vakuólumok.
3. Festési 0,5% Brillantzöld oldatot (0,5 g brillantzöld feloldunk 100 ml forrásban lévő desztillált vízben, és forrón szűrjük szűrőpapíron keresztül). A készítményt felhordjuk 0,5% -os vizes oldatával brillantzöld 1 percig, majd alaposan leöblítjük színezék alatt hideg csapvízzel, szárítjuk és mikroskopiruyut. A gyógyszer zöld - a sejtmagok zöld színűek, protoplazmák - világoskék. Slime zöld. A bakteriális növényzet különböző intenzitású zöld színű. Trichomonas vaginalis megkülönböztetni különböző formák, ezek között található a sejtes elemek a nyálka, a héj világosan látható, a lényege intenzív színű zöld, excentrikusan helyezkedik el, protoplazma mesh, világoszöld színű, színtelen vakuólumok.
4. Festés a módosított Gram módszerrel. A módszer alapja az a tulajdonsága a Trichomonas vaginalis és más Gram-negatív mikroorganizmusok bizonyos időszakaiban fehérítő etanolban, így a bázikus ibolya festéket dokrashivatsya, majd ezt követően további narancs-vörös.
- A kristályibolya 1% -os vizes oldatát (1 g kristályibol 100 ml forrásban lévő desztillált vízben oldjuk, az oldatot forró szűréssel szűrjük);
- vizes Lugolei oldatot (2 g kálium-jodidot feloldunk 300 ml desztillált vízben, 1 g tiszta jódot oldunk a kapott oldatban, szűrjük egy papírszűrőn;
- 96% etil-alkohol;
- 1% -os vizes, semlegesvörös oldatot (1 g semleges vörös, 100 ml desztillált vízben oldva, és papírszűrőn szűrjük.
A készítményt egy szűrőpapír szalaggal borítjuk és 1 percig kristályibolya 1% -os oldattal töltjük meg. Győződjön meg róla, hogy nincsenek légbuborékok a szűrőpapír és az üveg között, mert eltávolítják a szalagot a szűrőpapír kristálylila által nedvesített üvegből. 1 perc elteltével a papírt eltávolítjuk, a készítményt csapvízzel mossuk és Lugol oldattal öntjük, amelyet néhány másodpercig tartunk a kenet foltosodása előtt. Ezután a Lugol oldatának maradékát lemossuk, és a készítmény elszíneződését 96% -os etil-alkoholban végezzük. Az elszíneződést a szem szabályozása alatt végezzük el, felváltva a gyógyszert az üvegből származó alkohollal bevesszük és levesszük. Színtelenített hatóanyag mindaddig, amíg annak vékony részek megszűnik lefolyjon áramokat lila színezéket, és válnak halványszürke. A készítmény gyorsan folyó csapvízzel mossuk, majd 3 percig festjük 1% -os vizes nátriumvörös oldattal. A készítményt alaposan mossuk, amíg a vízsugár abból származó, áttetsző, és szárítjuk mikroskopiruyut. Ha a szín helyes, az előkészítés narancsvörös, vékony részeken, lila-ibolya vastagon. A sejtelemek (leukociták, hámsejtek) magjai részben megtartják az alapvető ibolyaszínű színt, azaz a közepén lila, narancsvörös periférián kell festeni. A magas színminőséget a készítmény elszíneződésének időben történő megszüntetése biztosítja.
A hüvelyi trichomonadok halványak - a héj vékony szalag formájában körülveszi a narancsvörös színű hálós protoplazmát, a lila vagy az ibolya, a flagella és a hullámzó membrán magja nem látható. Pozitív választ kell adni, ha csak a vaginális trichomonadák tipikus formáit észlelik. Ha megtalálható a módosított (kerek, atipikus, stb.), De hasonló a hüvelyi Trichomonas protozoa, akkor meg kell vizsgálni az anyagot ismételten, vagy vetni a tápanyagot.
A festett készítmények mikroszkópja egyszerű, olcsó és megfizethető módszer, amely nem igényel azonnali kutatást és speciális felszerelést. Azonban alacsony érzékenységű és specifikus.
A tenyésztési módszer
A kulturális módszer a legérzékenyebb és specifikus. A hüvelyi trichomonadok jó növekedést eredményeznek a mesterséges tápközegben, feltéve, hogy betartják a kutatáshoz és a termesztéshez szükséges anyagok mintavételének szabályait. A tápanyagoknak antibiotikumokat kell tartalmazniuk az egyidejű mikroflóra növekedésének megakadályozására. A hüvelyi trichomonadák fakultatív anaerobok. Optimális növekedés gyengén savas közegben, átlagos pH-ja 5,8-3,3 és + 37 ° C, így a tenyésztés előtt a tenyésztő tápközeget fel kell melegíteni, ha a hűtőszekrényben tárolják. A 37-38 ° C feletti hőmérséklet túlmelegedését elkerülni kell, mert a hüvelyi Trichomonas hőmérséklet-emelkedése rosszabb, mint a csökkenés. A sérülések vizsgálatához szükséges anyagot steril szondával vagy bakteriális hurokkal kell bevenni. A vizsgálat anyaga steril sóoldatként mosó centrifugátumként szolgálhat, amelyet steril Pasteur pipettával vezetnek be a tenyésztőközegbe. Steril Pasteur pipettát kell használni, ha az izolált törzseket újra felhasználják.
Amikor növesztünk folyékony média Trichomonas vaginalis tengerfenéken élő ad okot, hogy a sűrű törtfehér szilárd anyag formájában, amelyből Pasteur pipettával figyelembe anyag a vizsgálathoz a natív előállítására. Mikroszkópos vizsgálat kultúrák és azonosítási kell elvégezni 3 - 5 nap, a negatív eredmények 7-9 perc, és 11 - 17 napon a vetés után, mivel a hüvelyi trichomonadok tenyésztési ciklusának időtartama az inokulum méretétől függ. Az alsó növekedési natív készítmény egyikével állítjuk elő a fent leírt módszerek és mikroskopiruyut lencse 40 vagy 90, szemlencse 7 vagy 10. hüvelyi Trichomonas a látómezőben lehet egyszeri, vagy nagy csomókat, aktívan mozgó, a mozgás jól látható csillók és hullámzó membrán. Az RNIF módszerrel (közvetett immunfluoreszcencia reakció) végzett hüvelyi trichomonadok meghatározása lehetséges.
A kulturális módszer hosszú távú, drága médiát igényel.
Immunológiai módszer
Immunológiai módszerrel, hogy meghatározzuk fajlagos felszíni antigén Trichomonas vaginalis reakcióját indirekt immunfluoreszcens (RNIF) tárcsázásával „TrihoSlayd”. Az anyag a tanulmány kenetek léziók is alkalmazzunk egy tiszta mikroszkóp lefölözött dekolirovannoe (egy speciális lyuk), steril üveg eldobható próbákra, amelyek a vattapálcikát magas szorpciós tulajdonságait. Ha az anyagot tamponnyomással alkalmazzák, a csúszófelületet ismételten megérintik. Levegőn való szárítás után a kábítószer rögzített 5 percig 96% -os etanollal, vagy acetonnal (visszük fel a gyógyszerrel néhány csepp vízmentes acetont adunk, amíg annak teljes bepárlás). A rögzített gyógyszerek a legjobbak, mert nem ha tárolják, a hüvelyi Trichomonas összeomlik, ami megnehezíti a helyes diagnózis megállapítását. A rögzítés után a készítmény "festését" végezzük, amelynek két lépése van. Az első szakaszban a hatóanyagot felvisszük 30 ul reagenst №1- specifikus protivotrihomonadnye AT - és ez ben inkubáltuk nedves kamrában (a kiszáradás elkerülése a reagens) szobahőmérsékleten vagy 37 ° C-on 15 percig. A készítményt ezután desztillált vízzel mossuk, 30 másodpercig, levegőn szárítjuk, és felvisszük 30 ul reagenst №2 - protivotrihomonadnyh ellenanyagok ellenanyagok FITC - 15 percig inkubáljuk nedves kamrában, szobahőmérsékleten vagy 37 ° C-on Ezután ezt a készítményt addig mostuk desztillált vízzel 30 másodpercig, levegőn megszárítottuk, és mikroskopiruyut lumineszcens mikroszkópot olaj vagy víz immerziós rendszer. A mikroszkópiás készítményeket is előkészítik, mint a klamidia diagnózisa a RIF módszerrel.
A trichomonadokat polimorf membránhoz kötött struktúrák formájában detektálják, fényes zöld fény hatására. Az ingadozó formák elkenhetik a flagellát. A nem specifikus bakteriális növényzet narancssárga színű, hámsejtek, leukociták, a spermiumok narancssárga és vörösesbarna színűek. Engedélyezhető az epithelialis sejtek citoplazmájának nem-specifikus, diffúz, alacsony-zöld fénye, nyálka és idegen mikroflóra. Az eredmény negatívnak tekinthető, ha a kenetben nincs specifikus lumineszcencia, ha legalább 10 cellás elem kötelező.
RNIF módszer magas szenzitivitása és specificitása hasonló a kultúra módszer lehetővé teszi, hogy azonosítsa életképtelen formákat a kórokozó nem meghatározott kultúra. Ellentétben natív készítmények arra is rávilágít, atipikus formája és rögzített Trichomonas vaginalis. Ez növeli diagnosztikai jelentőségét. RNIF módszer viszonylag olcsó, könnyen kivitelezhető, nem igényel speciális berendezések, lehetővé teszi, hogy vizuálisan ellenőrzi a minőséget a befogó anyag és kap választ belül 40-60 perc. Mindez teszi a választandó módszer diagnosztizálásához urogenitális trichomoniasis.
A végső diagnózisa a betegség lehetséges észlelésekor a patogén vagy az antitestek jelenlétét a mentesítési elváltozások a beteg vérét vagy mikroszkópos módszerek, bakteriológiai és immunológiai (szerológiai) vizsgálatok.