Hidroxiprolin gazdag fehérjék és az ezeket tartalmazó kozmetikai készítményekben, szabadalmak Bank

A találmány tárgya hidroxi-prolin-gazdag glikoproteinek, amelyek lehet növényi forrásból származnak, és hogy azok a kozmetikai és gyógyszerészeti felhasználásra.

Ismeretes, hogy bizonyos glikoproteinek az állati eredetű, mint például a kollagén és a proteoglikánok mutatnak a jótékony hatása a bőrön, amikor a helyileg alkalmazható, mint olyan, vagy ha azokat megfelelő készítmények.

A kollagén, amely egy glikoprotein gazdag prolin és hidroxi-prolin, különösen használhatók önmagukban vagy kombinálva más polipeptid bázisok kezelésére ráncok és más nem esztétikus foltok kapcsolódó rossz a bőr hidratáltságát és rugalmasságát. Az állati kollagén vannak korlátai annak használata miatt a szennyeződés kockázatát a vírusok és toxinok. Bár a vegyületek növényi eredetű nem járnak ilyen kockázat, mostanáig ezek alkalmazása kozmetikai már meglehetősen korlátozott: például kozmetikai készítményekben ismeretes, amelyek a nyers kivonatok az ilyen növények például Aloe, vagy akár egész őrölt növényi termékek, mint például az avokádó.

Ismert növényi glikoproteinek nevezett estensinami amely származó növényi sejtek proliferációs fázisban, és amelyek szerkezete hasonló az állati kollagén. Az EP-A-05334078 leírja a kozmetikai alkalmazása extensines, amelynek átlagos molekulatömege nagyobb, mint 100000 dalton. Azonban, a módszerek extensines extrakciót az eddig leírt, amelyek magukban foglalják a növényi anyagok különböző eredetű útján vizes sóoldatok, amelyet tisztítás követ az erős savakkal, mint például triklór-ecetsav, nem teszik lehetővé olyan alkalmas termékek kozmetikai, problémák miatt kapcsolatos oldhatósági, ismételhetőség ellenállás és a kémiai-fizikai jellemzői.

Azt találtuk, hogy ez lehetséges hidroxiprolinban gazdag glikoproteinek, szerkezetileg hasonló a fent leírt extensines, de alacsonyabb mol. súly és nagyobb oldhatósága savas vizes oldatok, a folyamat, amely tenyésztést in vitro sejtek kiválasztott növények és az extrakciót sav-alkohol oldatok növekvő sejteket megfelelő környezetben.

A glikoproteinek szerint előállítható a találmány hidratáló, filmképző, tonizáló és elősegítő hegképződés tulajdonságai magasabb szintű, mint a kollagén. A glikoproteinek a találmány ezért felhasználható a kozmetikai vagy dermatológiai készítmények a száraz bőr kezelésére, a psoriasis, ichthyosis, korpásodás, keratosis, ráncok, akne, ekcéma, gyulladásos dermatózis, a bőr öregedését és minden más esetben, a várható használatát az állati kollagén.

Vizes oldatok, a glikoproteinek a találmány szerinti stabil marad anélkül, hogy polimerizációs a glikoproteinek képződéséhez vezető oldhatatlan termékek. Továbbá, a viszkozitása ezen megoldások különösen magas, és nem függ a koncentráció; 0,1% koncentrációban meglepően azonos filmképző és hidratáló teljesítmény, amelyek oldatok 1% kollagént, vagy 5% növényi albumin.

Növényi szövet kalluszokat alábbi sterilizálási és opcionális hozzáadásával antibakteriális szerek szokásosan alkalmazott inokulum Megfelelő folyékony táptalaj leírtak a fent említett kézikönyvben Dobbs és Roberts. Különösen alkalmas szűrőanyag a találmány szempontjából a Murashige és Skoog szerdán. A kívül adott adalékok, mint például prolin, redukálószerek, etilén- vagy kibocsátására képes vegyületek az etilén, mint például etefon vagy L- aminotsiklopropankarbonovaya sav, alkalmas lehet, hogy a termelékenység növelése, vagy a termelés a kívánt glikoproteinek.

Előnyös alkalmazása naftil-ecetsav, mint például auxin, 6- (γ, γ-dimetil-amino) -purin, mint a citokinin, vitaminok és 3% szacharózt szénforrásként.

Attól függően, hogy a kiválasztott anyag előnyös lehet hozzáadni a C-vitamin, hogy megakadályozzák megszerzése a végtermék barna.

A fermentációs idő változhat 3 és 12 nap, és előnyösen 5-6 nap. Azonnal befejezésekor a fermentációs táptalajt centrifugáljuk és a sejt masszát extraháljuk alkoholt, előnyösen etanolt, jelenlétében hígított ásványi savak, előnyösen sósav vagy kénsav. Ez az eljárás inaktiválja egyes enzimek, amelyek stabilitását veszélyezteti a glikoproteinek a találmány szerinti, különösen, polifenoloxidáz tirozinoksidazu és amelyek elősegítik a polimerizációs glikoproteinek a kialakulása követ, oldhatatlan termékek.

Az alkoholos extrakciós az ásványi savak jelenlétében lehetővé teszi a teljes kinyerése az alapvető glikoproteinek és végső soron nagyon szelektív. Ezen túlmenően az etanol lehet használni más vízzel elegyedő alkoholok, mint például metanol vagy izopropanol. A kapott vizes-alkoholos extraktumokat semlegesítjük, majd bepároljuk, és a hőmérsékletre melegítjük 70-100 ° C, előnyösen körülbelül 80 ° C, akár teljes kicsapódását a denaturált fehérjék. A szuszpenziót ezután derítjük koncentrációjának és a folyadék frakcionáltan ultraszűréssel, hogy eltávolítsuk a nagy és a kis molekulatömegű anyagok. Az ultraszűrést végzünk poliszulfon membrán, amelynek molekulatömeg cut-off 10,000-40,000 dalton, mint például Centricon R vagy Romicon R. szálak, amelyek lehetnek üregesek vagy, alternatív módon, felcsévélhető. A kapott szűrt terméket elektrodializált hogy eltávolítsák a nemkívánatos anyagokat, például sókat és az alacsony molekulatömegű cukrok. Szűrés után és a dialízis, a kapott oldatot lehet használni, mint például a kozmetikai vagy gyógyszerészeti készítmények vagy lehet koncentrált kisebb térfogatra, majd liofilizáljuk, vagy finomra őrölt.

Aminosav - csúcs terület%
Asp - 4.399
Glu - 4328
Hyp - 17505
Ser - 7065
Gly - 6056
HYS - 1782
Arq - 2471
Thr - 4739
Pro - 10036
Ala - 8,2
Tyr - 2388
Val - 6162
Met - 1154
Ile - 2479
Leu - 5525
Phe - 1862
Lys - 14254
A fenti adatok a százalékos aránya az összes jelen lévő aminosavak a glikoprotein keveréket. A cukrok a keverékben a arabinóz és galaktóz. Az arány a aminosavak cukrok egyenlő átlagosan 2: 1 a különböző termékekkel.

Amint a fentiekben említettük, a jelen találmány szerinti termékek használhatók a gyógyszerészet területén, és a kozmetika területén. A gyógyászati ​​terméket be lehet építeni a gélek vagy kenőcsök vagy alkalmazva a telíthető géz orvosi készítmény a különleges égések vagy sebek. Ebben az esetben a terméket rendszerint vetjük alá vagy steril szűréssel, és liofilizálás.

A kozmetikai és dermatológiai készítmények a találmány szerint állíthatók elő a hagyományos módszerekkel. Példák a beadási formák közé tartoznak a vizes spray-k, krémek, oldatok, emulziók, gélek, kenőcsök és krémek.

A kozmetikai és dermatológiai készítmények a találmány szerinti tartalmazhatnak hidroxiprolinban gazdag glikoproteinek mennyiségben körülbelül 0,01-körülbelül 50 tömeg.%, Előnyösen 0,05 és 5 tömeg.%, Valamint a hagyományos segédanyagokat. Ezzel a magas stabilitást a glikoproteinek a találmány szerinti, gyógyászati ​​és kozmetikai készítmények, amelyek több, mint 50% az oldható hidroxiprolinban gazdag glikoproteinek nyerhetők.

A glikoproteinek a találmány adhatunk gyógyszerészeti és kozmetikai készítmények önmagukban vagy azok mikrokapszulázhatjuk oly módon, hogy egy hosszú távú hidratáló lépéseket. A mikrokapszulák lehetnek hidrofil vagy lipofil. A találmányunk szerinti készítmények tartalmazhatnak más hatóanyagokat, amelyek kiegészítő vagy hasznos tevékenységet a kívánt célok.

A találmányt tovább szemléltetjük a következő példákkal.

1. példa
Előállítása a kalluszt, és folyadék kultúrával Gingko biloba előállítására glikoproteinek
Készítünk explantátumot fiatal levelek a Gingko biloba levelek mosással 0,1% Tween 80-at (Tween 80 R). Levél pengék szakaszokra vágjuk körülbelül 0,5 cm és előre sterilizált 1 percig 75% -os etanollal. Ezután a sterilizálás befejeztével egy 2% -os nátrium-hipoklorit-oldatot és tripla mosása az explantátum steril vízben. A kapott explantumokat egy Petri-csészébe a Murashige & Skoog közeg, amely 3% szacharózt, azzal a kiegészítéssel, Lynsmeyer & Skoog vitaminok és hormonok, így például 2,4-diklór-fenoxi-ecetsav és naftil-ecetsav. A termékek sötétben inkubáljuk 23 ° C-on 20 napig. Végén ezen időszak, morzsalékos kalluszokat kapunk, amely nő könnyen és fejleszteni folyamatos sorokban során átoltással azonos körülmények között, amelyben fel lehet használni szaporításra folyékony közegben. Calli használt innokulirovaniya-es Erlenmeyer lombikban 200 ml Murashige és Skoog tápközegben kiegészített naftipuksusnoy savval és 6- (γ, γ-dimetil-amino) -purin, Lynsmeyer & Skoog vitaminok és 3% szacharózt szénforrásként. A lombikokat keverés közben folyamatos fény 4 napig, ami után a sejt biomasszát begyűjtöttük a kitermelés az glikoproteinek.

2. példa
Előállítása glikoproteinek Gingko biloba sejtek
5 liter tenyészet példa szerint előállított 1-nél centrifugáljuk alacsony sebesség és a kinyert sejteket (1,5 kg friss tömeg) extraháljuk 1,5 liter 70% -os etanolban, amely 1% kénsavat. Az extrakciót kétszer megismételjük, ezáltal mennyiségileg kitermelése az alapvető glikoproteinek. Semlegesítés után, az extraktumokat szűréssel eltávolítjuk zavarosság és csökkentett nyomáson, 50 ° C-on, amíg a teljes eltávolítása az etanol. A vizes koncentrátumot elegyét 85 ° C-on 30 percig, majd ismét centrifugáljuk, hogy eltávolítsuk a csapadékot, amely eldobjuk. A kapott tiszta oldatot ultraszűrjük, egy Centricon R membránon cut-off 40.000 Dalton limit, hogy kizárja az anyagokat nagy molekulatömegű.

4. példa
A kozmetikai készítmény
100 g olaj-a-vízben emulzió tartalmazhat:
A 2. példa szerinti oldat, illetve 3-10,0
Acetilezett lanolin-alkohol, PEG-10-2,0
Cetil-sztearil-alkohol - 1,5
Cetilpalmitátot - 2.0
Sztearinsav - 7,0
Oktiloktanoat - 7.5
kálium-cetil-foszfát - 0,5
Tartósítószerek - Ha szükséges,
Íz - Ha szükséges,
A tisztított víz - 100 q
5. példa
A kozmetikai készítmény
100 g olaj-a-vízben emulzió tartalmazhat:
A 2. példa szerinti oldat, illetve 3-10,0
Tsetilstearilglyukozid - 5.0
Jojobaolaj - 10,0
Izopropil - 8,0
Dimetikon - 0,5
Antioxidáns - Ha szükséges,
Tartósítószerek - Ha szükséges,
Íz - Ha szükséges,
Tisztított víz - a szükséges mennyiség 100
További kísérleti adatokkal.

6. példa
A kozmetikai készítmény
Vizes oldat, g:
Ezután a keveréket a 2. példában vagy 3-2,00
Imidazolidinil-karbamid - 0,30
Metilparabén - 0,20
Hydroxyethyl - 2,00
7. példa
A kozmetikai készítmény
A gél, g:
Ezután a keveréket a 2. példában vagy 3-1,00
Propilén-glikol, diazolidinil-karbamid, metil-parabént, propil-parabént - 1,00
A tisztított víz - szükség szerint akár 100 MLT

KÖVETELÉSEK

2. Kozmetikai készítmény a bőr hidratáltságát, amely hatóanyagként egy keveréke glikoproteinek 1. igénypont szerinti.

3. kozmetikai készítmény A 2. igénypont szerinti formájában egy vizes spray, lotion, oldat, emulzió, gél, kenőcs, krém.

MM4A korai megszüntetése a szabadalom nem fizetés az előírt határidőn belül a díj fenntartása hatályos szabadalom