Módszerei frakcionálását és tisztítását proteinek - studopediya
• lerakódása szerves oldószerek;
• eloszlása a kétfázisú rendszerekben.
Mint ismeretes, az oldódás fehérjék vízben miatt hidratációs az egyes molekulák képződését eredményezi körül a fehérje molekula víz (hidratáció) kagyló, amely orientált egy bizonyos tér formában vízmolekulák. Ez a víz (hidratáció Shell) eltér a tiszta oldószer. Megoldások különböző fehérjék és az extrém instabilitása hatása alatt különböző tényezők megzavarása hidratációját fehérjék könnyen kicsapódnak. Ezért, a mellett, hogy a fehérje oldathoz bármely dehidratáló szerek (alkohol, aceton, tömény oldatok semleges sók az alkálifémek) és a hatás a fizikai tényezők (hő, besugárzás) eredményezi kiszáradás a molekulák és azok csapadék az iszap.
Sózás. Amikor nincs fehérje sózás sók, alkáli- és alkáliföldfémek fehérje általában elveszti a képességét, hogy újra feloldjuk vízben, miután a só eltávolítása (dialízissel, gélszűréssel). Például: globulinok kicsapódni 50% telítettség, és albuminok 100% ammónium-szulfátot. A veszteség a fehérjemolekulák a pelletben nagy jelentősége nem csak a sókoncentráció, de a hőmérséklet és az ionerősség az oldat.
kromatográfiás módszerek. kromatográfiás módszerrel kifejlesztett 1903-ban az orosz tudós MV Színes pigmenteket képességeik alapján (vagy más anyagok.) Specifikusan kötődnek az adszorbens, zárt egy oszlopban; Ezt használják szorpciós és deszorpciós folyamatok. Használata különböző kromatográfiás módszerekkel - adszorpció, partíció, ionnobmennuyu.
Adszorpciós kromatográfia - adszorbens az aktív szén, alumínium-oxid vagy szilícium-dioxid. Széles körben használják a fehérjék elválasztására és egyéb anyagok.
Megoszlásos kromatográfia. Ha ez az egyetlen szilárd fázisú hordozót a folyékony fázis számára. Faj papírkromatográfiával, oszlop ahol állófázisként szilikagélt vagy keményítő használható.
Ioncserélő kromatográfia. Ioncserélő gyanták polimer szerves vegyületek funkciós csoportokat tartalmazó képes részt venni ioncserélő.
Különböztesse bázikus aniont (szerves bázisokkal és aminokkal), kationcserélők tartalmazó fenol, szulfo és karboxilcsoportok. Széles körben használt DEAE (DEAE-cellulóz), trietilaminoetil (TEAE-ként), és amino-etil (AE) - cellulóz.
Affinitáskromatográfia (affinitás vagy kromatográfia) alapját az az elv szelektív kölcsönhatás specifikus fehérje anyagok rögzítve a hordozóhoz. A cián-bromiddal aktivált Sepharose-hoz (CNBr-Sepharose) használunk hordozóként, amelyhez kapcsolódik a különböző anyagok - a szubsztrát, koenzim, antigén, hormon, stb A módszer lehetővé teszi egy szakaszban szerezni egy erősen tisztított protein preparátum.
Gélszűréssel tisztítjuk, vagy molekulaszita - széles körben használják a fehérje-tisztításához a szennyeződést.
Sephadex (dextrán, poliszacharid mikrobiális eredetű, kezelik, hogy külön-protein) elválasztott fehérjéket különböző molekulatömegű, hiszen gabona Sephadex különböző szobákhoz különböző pórusméretű, amelyek képesek áthatolni bizonyos proteinek molekulatömegű.
Az elektroforézist alapul a sebességkülönbség a fehérjék elektromos mező, amely által meghatározott nagysága a felelős a fehérje bizonyos pH és az ionerősség az oldat. Kezdetben, a kifejlesztett módszer A. Tizeliusom közelmúltban széles körben alkalmazott módszer a zóna elektroforézissel fehérjék különböző közegekben - papíron (cellulóz), keményítő, poliakrilamid gélen. lemezt elektroforézis módszer poliakrilamid gélen lehetővé teszi, hogy kapjunk akár 50 fehérjefrakciók, azaz Ez egy nagyon nagy felbontású.
Izoelektrofokuszálási fehérjék - a amfolint lehetővé elkülöníteni az egyes fehérjéket preparatív mennyiségben.
Ultracentrifugálással sűrűség gradiens szacharóz vagy cézium-klorid már széles körben használják a tisztítására és molekulatömeg meghatározása fehérjék ülepedési konstans (Svedberg egység - S).
A fehérje tisztítását a kis molekulatömegű szennyeződések érik el dialízissel, gél szűréssel, kristályosítással, ultraszűréssel. Amikor dialízist alkalmazunk féligáteresztő membránt (celofán kolloidinovaya film), a pórus átmérője, amely tág határok között változhat. Fehérjék általában keresztül egy ilyen membrán nem diffundál, és a kis molekulák könnyen hatoljon át a környezetbe. A legjobb eredményeket nyújt módszereket gélszűrés és ultraszűrés, például lehetővé teszi a szabad a kis molekulatömegű komponensek, és koncentrálni a fehérjék.
Meghatározására szolgáló módszerek a homogenitását fehérjék. A legjobb eredmények adnak ultracentrifugálással, sűrűség gradiens, meghajtó-poliakrilamid gél elektroforézis, immunkémiai módszerekkel.