Meghatározása az izoelektromos pont
Célkitűzés: ismerkedés a meghatározó módszer az izoelektromos pont (IEP) a fehérje.
Az ábrák rövid elméleti bevezetés.
A felszínen a részecskék a diszpergált fázis során érintkezik a folyadékkal spontán bekövetkezik, és a felesleges elektromos töltés képződik potentsialobrazuyuschy réteg ionok. Ahhoz, hogy a szilárd felület a folyékony közeg vonzódnak ionok ellenkező előjellel potentsialobrazuyuschego rétegben. Ezek az úgynevezett ellenionok. Van egy elektromos kettős réteg (EDL). Meg lehet tekinteni, mint egyfajta kondenzátor, a belső lemez, amelynek van kialakítva egy réteg potentsialobrazuyuschego ionokat és a külső - ellenionok. Az ellenionok vannak két pozíció: egyikük képez adszorbens réteg, a másik pedig a diffúziós rétegben.
A potenciális felületén megjelenő kolloid részecskék, úgynevezett elektrokinetikus vagy # 950; (Zeta) -potential. A elektrokinetikai potenciál számszerűen egyenlő a munkát, amely szükséges ahhoz, hogy a töltésátviteli a felületről belsejébe az egység pelletek és a diszperziós közeg, vagy fordítva.
Az a pont, ahol a zéta potenciál nulla nevezik izoelektromos pont. Ezen a ponton van, teljes kártérítési potentsialobrazuyuschego counter-layer, azaz minden potivoiony lesz az adszorpciós rétegben.
Ebben a laborban, meg kell állapítanunk, izoelektromos pontja a fehérjét.
Az általános képlet a fehérjemolekula felírható a következőképpen:
R- szénhidrogéncsoport,
NH2 - aminocsoport, amely rendelkezik az alapvető tulajdonságokat, mert savas környezetben hozzáad egy proton alkotnak egy ion NH3 +,
HOOC-savcsoport, amely disszociál hidrogénion H + és savmaradék - COO -.
A savas környezet a fehérje kolloid részecskék pozitív töltés:
és lúgos környezetben - negatív töltés:
Fehérje makromolekulák állapot, amelyben a száma az ionizált savas csoportok ionizált egyenlő a számos alapvető csoportok, és ezért, összesen átlagosan mértéke nulla makromolekulák úgynevezett izoelektromos állapotban. A pH, amelyen a fehérje molekulák izoelektromos állapotot nevezik izoelektromos pontja (pl). A izoelektromos pontja a fehérje fontos jellemzője meghatározó tulajdonságait egy adott környezetben.
Az izoelektromos pont kerül meghatározásra kazein vagy zselatin.
Eldörzsöljük fehérje (kazein vagy zselatin) egy mozsárban, amíg a porított állapotban. A lombikot 100 ml 0,4 g fehérje, 10 ml 1 N nátrium-acetátot és 70 ml vizet. A lombikot melegítettük, hogy 70 ° C-on erőteljes rázás oldott fehérje. Ezután adjunk hozzá vizet a jelig. Az oldat enyhén zavaros, de nem foglalja magában a pelyhek és kicsapódnak.
A 7 csésze szerinti számuk (lásd. 6. táblázat) öntünk vizet és az ecetsav. Ezután minden főzőpohárba 5 ml kolloid oldat a fehérje és 10 perc múlva jelet, amelyeknél a koaguláció történt megoldásokat.
6. táblázat meghatározása fehérje pI.
A „megjegyzések” oszlop van írva: „Nem koagulációs”, „homályos”, „csapadékot”, „a legtöbb üledék.”
A pH az összes megoldások mértük egy pH-mérővel.
A felhasznált papír zseb pH mérő PICCOLO-pH-mérő HANNA gyártó cég. Ez a pH-mérő tömege 100 g, és a elemekkel működik. Az elektródarendszer a készülék egyesíti a pH-elektródot, referencia elektród, hőérzékelő és az erősítő. Egy ilyen rendszer minimalizálja a befolyása a nedvesség, piszok, és a zaj a pontosságát pH-mérés. PICCOLO ad viszonylag pontos leolvasást stacionárius pH-m (± 0,02 pH). Automatikus hőmérséklet-kompenzáció által beépített hőmérséklet-érzékelő és a mikroprocesszor PICCOLO, automatikusan kompenzálja a hőmérséklet-változtatás hatását a 0-tól 70 ° C-on, amely nagy pontosságot biztosít a pH mérés.
Hosszabb tárolási idő után, a pH-mérőt áztatjuk - HI 70300L oldat vagy puffer oldat pH 7,01 4 órán át. Ezután egy kétpontos kalibrálás a műszer. Ehhez:
1) Öblítés elektród ionmentes vízzel, majd puffer HI7007;
2), hogy ne merítse az elektróda (7. ábra), hogy a puffer-oldat HI 7007;
3) kapcsolja be a készüléket (kapcsoló "ON / OFF"
(1, ábra7), és egy kalibráló csavar „pH 7” állítva rN7,01 leolvasott;
4) Öblítés elektród ionmentes vízzel, majd puffer HI7004;
5), hogy ne merítse az elektróda egy pufferoldatot és beállító HI7004 csavar csavarhúzó „pH 4” -, amíg az indikátor azt mutatja, pH 4,01 (25 ° C-on). Kapcsoljuk ki a készüléket ki / be kapcsolót (1 7. ábra).
A jelentés jelzi, hogy milyen érték felel meg az izoelektromos pont pH a vizsgált fehérje.
1. magyarázza képződésének mechanizmusát a villamos kettős réteg felületén a diszpergált részecskék.
2. Mi a neve Elektrokinetikus lehetséges?
3. Név elektrokinetikus jelenségek diszperz rendszerek és elmagyarázza, mi ezek miatt.
4. Hogyan határozzák meg a zéta-potenciál?
5. Az úgynevezett izoelektromos pontja a fehérje? Vázlatos képletű fehérje makromolekulák jelen a izoelektromos állapotban.
Laboratóriumi munka №9.