vírus inaktiválási módszerek
vírusinaktiváló módszerek. Kémiai módszerek a virális inaktiválás.
Az ipari termelés a vírus készítmények növekvő sebességgel részt egyre több vírusellenes szerként. A túlnyomó többsége az új objektumok csoportjába tartozik az úgynevezett „burokkal rendelkező vírusok”. A tendencia a gyors csökkenése közötti időszak nyitó másik patogén és szervezése laboratóriumi és ipari termelés inaktivált készítmények.
Biztonsági követelmények szigorúbbak szükségessége miatt sok esetben a koncentrátumok előállításához virális antigének. Meg kell jegyezni, hogy inaktiválása ne csak hatékony, hanem a legszelídebb (szelektív). Más szóval, a kísérő változások a szerkezetben a vírus részecskék és alkatrészeik minimálisra kell csökkenteni. Azonban a mechanizmus inaktiváló hatását sok tekintetben nem eléggé tisztázott, és azok használata gyakran empirikus kérdés.
Mivel virionok központjában aggregátumok képződnek celluláris és a szérum komponensek. lehet védve inaktiválás, megsemmisítése és eltávolítása, aggregátumok különböző tisztítási módszerek fontos vírus-szuszpenziót, mielőtt inaktiválási lépés. A termelés teljes vírus nem-replikálódó vakcinák alkalmazásával kémiai és fizikai vírusinaktiváló módszerek.
Kémiai módszerei vírusinaktiváló
A kémiai vegyületek leggyakrabban használt két fő típusa inaktiválószerekkel: retikuliruyuschie (szétesést elősegítő) szerek és alkilezőszerek.
Azáltal retikuliruyuschim szerek közé tartoznak aldehidek, beleértve a formaldehid, glutáraldehid és Glycidaldehyde, amelynek formaldehidet használunk leggyakrabban. Azáltal Alkire szerek közé betapropiolakton, etilénimin és más aziridinek.
A hatásmechanizmusa inaktiváló szerek. Valószínűleg ez a következő: 1) kölcsönhatásba lépő nukleinsavak, teszik lehetetlenné lemásolni; 2) okoznak kiépítés fehérjék.
A hatásmechanizmusa inaktiváló ágensek, hogy jobban megértsék való alkalmazása fehérjék, mint a nukleinsavak, bár általában nem teljesen tisztázott. A vírus inaktiválása úgy tűnik, hogy alapul kettős hatású térhálósodását fehérjék, amelyek kölcsönhatásba lépnek a celluláris receptorokhoz és a blokád replikációs nukleinsavak. A koncentrációja inaktiváló szerek elsősorban attól függ, a relatív koncentrációja a fehérjék és nukleinsavak a inaktivált közegben. A hőmérséklet és a homogenitását az inaktivált szubsztrát is kulcsszerepet játszanak a kinetikája virális inaktiválás.
Képes megváltoztatni reverzibilitás reaktív csoportok (a lizin amino-csoportjának, a tirozin fenolos magon) figyelembe kell venni, különösen abban az esetben a formaldehiddel.
A teljesség vírusinaktiváló kell meghatározni után azonnal a vakcinát.
A legtöbb hagyományos inaktiváló ágensek közé tartozik a formaldehid, béta-propiolakton, és etilén-imin. Az egyik előnye a béta-propiolaktonnal gyártására használható vakcina veszettség elleni, etilénimin és gyártásához használt vakcina elleni száj- és körömfájás, az, hogy azok teljesen hidrolizáljuk néhány órán belül a nem-toxikus termékek.
Formaldehid inaktiválja a vírusokat a magas reaktivitás, a fehérjék és nukleinsavak. Jön a kapcsolat nem csak a vírus részecskék, hanem számos összetevője közül a környezet, amelyben van hozzá.
A mechanizmus a vírusinaktiváló formaldehiddel összetett, és az jellemzi, két típusú reakciókat. előállítására formaldehid és egy nukleinsav és proteinek a vírus zajlik, ennek megfelelően, az a reakció típusát az első és a második sorrendben. A legjelentősebb először inaktiválása, amely azonban nagyban függ a második.
Kommunikáció a nukleinsavak és fehérjék, a formaldehid reagál elsősorban aminocsoportokkal. Csatlakozási formaldehid aminocsoportokhoz purinok és pirimidinek elpusztítja a tevékenységi mátrix és az információs nukleinsavak.
Formaldehid reagál gyorsabb ütemben az aminosav csoportok aminosavak és fehérjék alkotnak metilol-származékai, mint nitrogéntartalmú bázisokkal nukleinsavak. Az a benyomásom, hogy a fehérjék és nukleinsavak a vírusok formaldehiddel reagál két szakaszban. Kezdetben, eredményeként a kölcsönhatás a formaldehid egy amino- vagy imino-csoportokat, nagyon gyorsan kialakul instabil metilol-származékot, majd, ennek eredményeként a másodlagos reakciók - bismetilenovye származékok.
Kölcsönhatás termékek formaldehid aminosavakkal reagálni képes nukleinsavak lényegesen gyorsabb, mint a formaldehid.
A második lépés egy lassú kölcsönhatása az elsődleges termékek a reakció más protein-csoportok, így a képződését kovalens kötésű polipeptid dimerek. Ebben a lezárt boríték fehérje és csökkenti a permeabilitás. Ez csökkenti a sebességét inaktiválása a vírus. Hatása alatt a formaldehid kullancsencephalitis virionok alakított glikoprotein dimerek és komplex RNS nukleokapszid fehérjék. Az utolsó jellemzője a magas stabilitás és elpusztítani csak RN. Azt feltételezzük, hogy a szóban forgó komplex - az alapvető mechanizmus vírusinaktiváló. Glikoprotein kivont inaktivált vírus, amelyen normál antigén és immunogén aktivitása.
Meg kell jegyezni, hogy a reakció a formaldehid és aminocsoportok reverzibilis, azaz eltávolítja a felesleges reagenst oldatban vagy hígítási nukleinsav aktivitás helyreáll. A kölcsönhatás folyamat a vírus formaldehiddel tényezőktől függ, mint például a reagens koncentráció, hőmérséklet, pH-ja a közeg.
Optimális körülmények között a inaktiválása reakciót formaldehid és fehérjék számos vírus nem befolyásolja jelentősen az antigén tulajdonságait. Azonban számos vírus elveszti jelentős részét antigénaktivitásban formalin inaktiválása. Ez különösen igaz a burokkal rendelkező vírusok, és mindenek felett, a vírusok, a kanyaró és a légúti óriássejtes (PC) vírus. Például, formalinnal inaktiválhatók értékű vakcina PC-vírus képződését okozza fehérje antitestek F, nem, hogy elnyomja azt, és a fertőző simplastoobrazuyuschuyu aktivitást. Ezenkívül a vakcinálást vezet szövődmények annak további előfordulás. Valószínűleg, az intézkedés alapján formalin módosított glikoprotein epitópokat felelős semlegesítő antitestek indukálását.
Ez mindenekelőtt a felszíni F protein felelős védő immunitást. Azonban sok a vírusok, amelyek viszonylag jól tolerálták inaktiválása formalin, nagyon érzékeny a környezetére. Növelése a formaldehid koncentrációja tízszer vagy több képest az optimális (0,1%) vezet morfológiai változások a hepatitis B vírus felületi antigén, és csökken annak aktivitását, míg a növekedés a feldolgozási idő a tisztított poliovírus kapszid kíséri jelentős károsodása néhány virionokat. Annak érdekében, hogy enyhítsék a káros hatását formaldehid a antigenitás és immunogenitás a vírus elkezdte használni stabilizáló szereket. Talált, például, hogy az addíciós arildona (5,4 M) nem volt hatása inaktiválás legyengített és virulens törzsei poliovírus formalinnal (1: 4000, 37 ° C), és, ugyanabban az időben, segít megőrizni immunogenitást stabilizálásával D-antigén.