Beszerzése szöveti primer tenyészet
Az első lépésben a megszerzése primer tenyészet történik steril eltávolítása állati szövet-fragmens és a mechanikai vagy enzimes zavar. A szövet lehet könnyen apró darabokra aprítjuk, hogy csatolja a lemez felületén saját tapadóképessége, jelenlétében rovátkák az csészét vagy a plazmoid. Ezekben az esetekben, a sejt növekedés fog bekövetkezni és fragmentumok sejtek vándorlását explantátum lehet használni passzálással. Így például, lehet kapott tenyészetet bőrsejtek - fibroblasztok.
Elsődleges tenyészetet is elő felbomlása szöveti enzimekkel, például tripszinnel vagy kollagenáz. Kialakult sejteket ezt a szuszpenziót lerakódnak, kapcsolódnak, és felületén szélesztettünk üvegből vagy műanyagból. Tehát a hámsejtek, egyes sejtek az embrió.
Másodlagos tenyésztése az elsődleges kultúra.
Miután az elsődleges tenyészet egyrétegű állapotának elérése, ez lehet mozgatni egy második tenyésztőedényben a tripszines disszociációja az egyrétegű sejtek és hígításainak, azaz passzált vagy tenyésztettük.
A szuszpenziós tenyésztéshez esetén szubkultúrában csak annyi hígításban.
A disszociációs egyrétegű sejttenyészet érjük el mosásával egyrétegű foszfáttal pufferolt sóoldattal (PBS), vagy PBS-ben 1 mM etilén-diamin-tetraecetsav (EDTA), majd inkubáltuk tripszin-oldatot (0,25% -os oldat nyers 0,01 vagy 0,025% -os oldat A tisztított) 15 min.
Ezután, a tripszin eltávolítjuk, a sejteket szuszpendálunk egy tápközegben, meghatározzák azok számát és oltottuk új lombikokba.
Cseréje közegben.
Hogyan állapítható meg, hogy itt az ideje a sejt tenyésztésben?
sejtek alkotnak sűrű egyrétegű;
indikátor festéket színe megváltozik (például, az indikátor festék Phenol Red (fenolvörös) változtatja színét élénk piros friss tápközegbe a sárga-narancs egy közegben tenyésztett egy ideig sejtek)
46) Mi a stabil sejtvonal
Stabil (stabil) sejtvonal (létrehozott sejtvonalak) [lat. Stabilis - rezisztens; Lat. linea - helyét valami egy sorban] - kultúra képes sejtek korlátlan rostuin vitro. Kapunk a beoltott sejttenyészetek, amelynek sejtjei szerez szelektív előny, és egy megnövekedett növekedési sebesség
In vitro (latin "üvegben".) - vypolneniyaeksperimentov ez a technológia, ha a kísérleteket végeznek "vprobirke" - áll zhivogoorganizma. Általános értelemben, ez a kifejezés a szembe terminuin vivo - egy kísérlet in vivo (emberben vagy kísérleti állatban). Sok kísérlet kapcsolatos kmolekulyarnoy biológia, biokémia, gyógyszertan, orvostudomány, genetika stb végzik a testen kívül, a kultúra zhivyhkletokili egy sejtmentes modellben.
In vitro kísérletek. azokban az esetekben, amikor az alternatív vannak állatkísérletekkel vagy emberben, tartják kevésbé megbízható, Chemin vivo [1], és gyakran szükséges előzetes lépést becsléséhez a lehetőségét és szükségességét a későbbi issledovaniyin vivo [2]. Gyakran azonban csökkenti az árat az előzetes vizsgálati szakaszban, és lehetővé teszi, hogy mentse az életét a kísérleti állatok.